本发明公开了一种细胞收集方法、细胞材料。针对现有Transwell迁移研究对实验结果提示的科学内容利用有限的缺陷，本发明首先提供了一种细胞体外收集方法。本方法在Transwell细胞迁移培养结束并去除Transwell上室、下室内培养液后，采用胰酶消化并结合机械振荡的方法分别对Transwell细胞迁移实验后上室、下室中的细胞进行消化、收集；胰酶细胞消化操作中，洗涤液为pH 7.35～7.45磷酸盐缓冲液，胰酶细胞消化液含0.25％胰酶和0.01％EDTA。本发明同时提供一种包括由相同趋化因子诱导下分离产生的高迁移性活细胞材料与低迁移活性细胞材料。本发明还提供上述收集方法与细胞材料在细胞生物学行为分析试验中的应用。本发明能够使Transwell体外迁移实验拓展到细胞迁移的细胞生物学行为与分子生物学研究。

成果描述：脱细胞真皮基质是由动物或人类的皮肤，通过物理、化学、生物学等方法，除去了皮肤的全层表皮及真皮层中的全部细胞成分，保留了真皮的胶原（纤维）成分和组织基本结构的材料。其主要成分为胶原纤维，保留了胶原的生物活性。能够作为支架材料，吸收、聚集人体细胞，促进细胞的粘附、生长、增殖，促进伤口愈合和组织修复。在总结前人研究的基础上，经过十多年努力，构建出包括3项专利和7项专有技术为核心的具有自主知识产权的技术体系，采用自主研发的专利技术清除动物皮中的抗原物质、采用新一代交联技术调控在体降解、采用独特的成型加工技术实现工业化大生产等。与同类产品相比，本产品拥有四大技术优势和三大性能优势，具有抗原性低、无排斥反应、降解可调控、亲水性能优良等优点，所制备的材料达到国际先进水平。市场前景分析：该产品可以用于：（1）烧伤、创伤修复与瘢痕治疗；（2）耳鼻喉科的应用；（3）面部整容；（4）神经外科；（5）其它：如医用组织补片、尿道重建、组织工程支架、各种先天性和后天性缺损、凹陷的填充等方面。与同类成果相比的优势分析：1.外观：洁白，遇水后白色微透明。 2. 收缩温度：74±6℃ 3. 重金属总含量：≤10μg/mL 4. 灰分：≤2% 5.羟脯氨酸含量：不小于氨基酸总含量的5% 6.无菌：无菌 7.体外细胞毒性：细胞毒性反应不大于1级 8.热原：无热源 国内领先。

仪器以“8核”螺旋流道惯性分选芯片为核心，集成了被动流量调节阀，使得仪器可以采用低成本的隔膜泵作为进样驱动。仪器具有多次分选、回液、富集浓缩及自动清洗等多种模式。可全自动实现血液中肿瘤细胞的高通量自动分选和浓缩。两次分选后血细胞去除率99[[[%]]]，癌细胞回收率80[[[%]]]以上。该仪器无需复杂的生化标记，有望为癌症转移的早期诊断和有效预后评估提供重要工具手段。

1 成果简介宫颈癌是发展中国家女性最常见的恶性肿瘤，每年全球新发病例中，中国占据近三分之一， 有效的癌前诊断可以大大降低宫颈癌的死亡率。目前，液基薄层细胞学技术（ TCT）成为宫颈癌的筛查手段中最好的推荐方法之一， 是国际上使用最广泛的一种宫颈癌变的筛查技术， 为宫颈癌早期诊断和治疗提供了非常明确的诊断依据，提高了对低度以上鳞状上皮病变的检出率。 采用液基薄层细胞检测宫颈脱落细胞，明显提高了子宫颈细胞的样本检测质量，对宫颈癌细胞的检出率可以达到 100%，同时还能发现部分癌前病变，微生物感染等。常规的巴氏涂片收集细胞量很少，而且血液、粘液、炎症等因素会影响涂片的质量，使样本模糊，存在检测误差。 液基薄层细胞学技术中细胞保存液的配置是关键技术，目前本实验室进行相关研究，研制的脱落细胞保存液独有的处理血液及粘液消化技术，标本无需前处理，解决标本中大量的血液及粘液带来的干扰，同时保持细胞形态完整，保证每张片子的细胞数量及制片的成功率。保存液能在 15 分钟内灭活病源微生物； 试剂 成本低，保质期长，制片效果好，可以推广应用到宫颈癌的筛查中，提高阳性检出率。  图 1 巴氏涂片（×100）2 应用说明经过多家医院的实际临床试验，该保存液可以快速裂解红细胞；快速固定样品中的白细胞、脱落细胞等待检测的细胞，并且可以有效地防止细胞自溶；稀释粘液，将细胞从粘液中分离出来； 有利于后面使用的生物染色剂着色，便于观察诊断。经本细胞保存液固定保存的细胞，细胞形态完好，能保持样品采集时细胞的原始形态，不会发生膨胀、固缩等形态变化，保证待检测的有效细胞的数量和质量要求。本保存液使用简单， 操作方便，同时克服了传统检查方法的不足。在实际宫颈癌的筛查中，可以提高癌症的阳性检出率。3 效益分析本项技术可以在女性宫颈癌筛查中普及使用， 诊断子宫颈癌、子宫颈内膜癌极其癌的前期变化、人乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒感染以及滴虫性阴道炎、霉菌性阴道炎、细菌性阴道炎等微生物感染， 提高阳性诊断率。 本项技术成本低，特别适合在较落后地区进行普及使用，改善医疗条件，可以有效地降低落后地区女性宫颈癌的死亡率。进口 Tinpreper TCT 系统配置的保存液为 60 元/人份，国内同类产品的费用在 45 元/人份左右（每瓶 20 mL 液体），而本产品只需不足 10 元的成本，本项技术具有很好的经济性。4 合作方式技术转让或合作开发， 商谈。5 所属行业领域医疗卫生。

复发转移是恶性肿瘤死亡的首要原因，循环肿瘤细胞（Circulating tumor cells，英文缩写CTCs）作为从实体瘤原发灶或转移灶脱离进入外周血循环的肿瘤细胞，在恶性肿瘤转移中发挥关键作用。CTCs在血液中极为稀少，约每1亿个细胞中有1个CTCs，其检测技术起点高、要求高，存在技术壁垒，同时深入理解侵袭表型CTCs产生及介导肿瘤复发转移的分子机理，研究CTCs检测临床实践过程中的意义和价值，能够细化、量化肿瘤复发转移模式，是解决恶性肿瘤复发转移这一“老、大、难”临床问题的重要

产品详细介绍

随着原油重质化和重质油品轻质化加工技术的发展，用于石油化工加热炉燃料油的质量、燃烧性能越来越差、粘度越来越高；为利用催化装置的甩油，将其过滤后加入燃料油中，使燃料油中铝或其它重金属成分增加。由此使得燃料油雾化质量差、不完全燃烧损失增加；烟气中熔融状态的物质多，辐射炉管结垢严重。不但使得石油化工加热炉热效率降低，而且使得石油化工加热炉辐射室传热量减少，处理能力不满足生产需要。为了消除燃料油的质量、燃烧性能变差给石油化工加热炉运行带来的不利影响，保证石油化工加热炉“长、安、稳、满、高效”运行和减少排烟对大气的污染，我公司开发研制出具有减粘、促燃、减少S0x生成量和减缓辐射炉管结垢性能的油溶性重质燃料油添加剂。技术指标为： 添加剂加入量小于0.5%。 燃料油的粘度降低30%。 燃料油的燃烧速度提高3~8倍。 石油化工加热炉热效率提高2%。 烟气中S0x浓度降低50%。 辐射炉管结垢速率降低80%~90%。 添加剂在使用中对生产装置、管线无不良影响。

成果与项目的背景及主要用途： 间三氟甲基苯酚是间氨基三氟甲苯的主要衍生产品之一，它是合成酰氨类农 药除草剂“吡氟草胺”的关键中间体。另外，其嘧啶丙烯酸酯作为农药杀菌剂使用； 在医药领域，用于合成抗菌素重要中间体 3-芳基甲基头孢菌素衍生物，合成抗惊 蕨药物苯基苯氧乙基氨基磺酸酯，抗结核病药物 N、N-二苯基脲衍生物。 根据目前文献报道，间三氟甲基苯酚的合成方法有五种: 过氧化氢氧化法, 三氟甲基烷基化法,电解法,重氮化水解法,醚水解法等。其中重氮化水解法所使用 的原料便宜易得,反应条件温和, 产品的收率和纯度高。该法是目前工业上应用得 最广泛的方法。 技术原理与工艺流程简介： 由文献资料以及生产的可行性分析,通过间三氟甲基苯胺重氮化、再水解的工 艺是较好的可行工艺,但目前存在的缺点是得到间三氟甲基苯酚的收率较低。分 析原因主要有,一是在重氮化反应结束后,会有少量亚硝酸存在,在加热水解时,会 产生氧化反应,使焦油产生较多。二是在加热水解重氮盐时,重氮盐一次性都在反 应器内进行分解,分解时间长、副反应多、焦油也多。 针对上述问题，天津大学采用改进的重氮化水解耦合水蒸汽蒸馏工艺，制备 间三氟甲基苯酚，具体方案是,将间三氟甲基苯胺重氮化反应制得的重氮盐水溶 26天津大学科技成果选编 27 液滴加到含有尿素的水介质中加热水解,同时通入水蒸气蒸馏,使水解产生的间三 氟甲基苯酚马上被蒸馏出,减少分解副反应,减少焦油生成量。产品收率>90%，纯 度>99.5%，与目前已有工艺水平相比，收率提高 10%以上，纯度达到优级品标 准。 技术水平及专利与获奖情况： 已获得成熟的小试技术成果，已获得专利授权（ZL201010126241.2 ） 应用前景分析及效益预测： 间三氟甲基苯酚是具有广泛用途的精细有机中间体，本生产方法的反应时 间短、技术简单、操作条件温和；获得的目标产品纯度高，收率高；水解废水可 以回收利用；是生产间三氟甲基苯酚极具竞争性的技术，具有可观经济收益预期。 应用领域：精细化工领域（农药、药物和染料） 技术转化条件（包括：原料、设备、厂房面积的要求及投资规模）： 主要原料：间三氟甲基苯胺、尿素、硫酸、亚硝酸钠、二氯甲烷 主要设备：重氮化反应釜、硫酸高位槽、亚硝酸钠配制罐、重氮盐滴加罐、 水解罐、水蒸气发生器、蒸馏液接收罐、萃取罐、蒸馏釜等 厂房面积：150-200m2 投资规模：主要设备投资 100 万元 合作方式及条件：拟与企业联合进行中试及工业化生产。