"磷脂酶 D （PLD）是一类具有水解作用和磷酰基转移作用的酶, 在磷脂改性方面发挥着重要作用。它可以将大量磷脂酰胆碱(PC) 催化合成为自然界稀有的磷脂质，如磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PS)和磷脂酰甘油(PG)等，合成的磷脂质在医药和食品工业具有很大的应用前景。但由于来源不足和价格高，PLD的工业应用一直受到限制。本项目通过基因工程和微生物发酵技术，解决了PLD工业化应用中难表达和表达量不足的难题，利用重组大肠杆菌发酵实现了PLD的高水平表达，其酶活为106 U•L-1，产量为748 mg•L-1，分别比目前报道的最高水平提高了100倍和20倍；同时，本项目还建立了一种简单有效提取重组PLD的方法，可望大大降低PLD的生产成本。本技术先进，应用前景看好，如按106 U•L-1的发酵水平生产，成本约100元人民币/1000 U，目前市场售价在3000-6000元/1000 U，利润空间很大。 "

项目研究背景 ：抗菌肽是在某些诱导条件下，由动植物体内防御系统 产生的对抗外源性病原体致病作用的防御性阳离子多肽类抗菌活性物质。 抗菌肽具有特殊的抗菌机理和广谱高效的抗菌活性。天然抗菌肽获取困 难，主要是采用基因融合的方式进行外源表达。利用生物技术表达、改造 抗菌肽，提高抗菌肽抗菌活性，从而开发出对人体和环境安全无毒的食品 防腐剂和农药产品，还可开发出一类新的抗生素产品。 技术性能 ：本研究在国内首次报道利用大肠杆菌

磷脂酶D（PLD,EC 3.1.4.4）是一类广泛存在于各种生物体的酶，具有水解作用和磷酰基转移作用（见图1）。作为一种酶制剂，PLD的转磷脂酰活性尤为重要，被用于制备具有生物活性的稀有磷脂。其中，以大豆磷脂酰胆碱（PC）为底物，PLD酶法制备磷脂酰丝氨酸（PS），受到广泛关注。PS作为脑健康营养补充剂，相继被美国FDA、日本HBM和中国国家卫生计生委所认证，列为新资源食品。相较于提取自牛脑和植物的PS，生物酶法制备的PS，避免了食品安全和植物源含量低的问题。进一步，一些新的结构和功能磷脂，通过PLD转磷脂酰反应被合成出来，例如，磷脂酰鲨肝醇、磷脂酰葡萄糖、心磷脂类似物、磷脂酰酪醇、磷脂酰萜烯和磷脂酰丝氨醇，它们中一些具有抗癌和抗氧化活性。 直到现在，受限于磷脂酶D来源不足和价格高（链霉菌属PLD，≥150 units/mg，6516.9¥/1000 U，Sigma公司），其工业上的广泛应用受到限制。例如，文献报道的PLD最高产量在104-105U·L-1，而制备转化得到每公斤PS，需要2.6×106U的PLD。这一障碍的主要原因是高水平表达的PLD对宿主的严重细胞毒性，导致细胞死亡。 历经5年时间，从上游到下游整体设计，我们解决了毒性蛋白（磷脂酶D，PLD）异源表达难的问题（质粒不稳定、蛋白合成时间短、细胞生长抑制和裂解），PLD生产达到目前世界最高水平106U·L-1(748 mg·L-1)（提高20倍）；同时发展一种简单有效提取重组磷脂酶D的方法（无需破碎、无需添加溶菌酶和有机溶剂、室温进行），PLD生产成本有望降低20倍以上。按照实验室规模的一台5 L发酵罐，年产量可以提供3.5×108U的磷脂酶D，满足100 kg的PS转化需求计算（不计算PLD重复利用率），扩大反应器体积至100-1000 L，PLD产量可满足制备2-20吨PS的需求。

成果与项目的背景及主要用途： 蚯蚓又称地龙，是以土壤中的动植物碎屑为食，经常在地下钻洞，把土壤翻 得疏松，使水分和肥料易于进入土壤而提高土壤的肥力，有利于植物的生长；据 测定，蚯蚓的蛋白质含量约占干重的 53.5%-65.1%，脂肪含量约为 4.4%-17.38%， 碳水化合物约为 11%-17.4%，灰分 7.8%-23%。蚯蚓体内还含有丰富的维生素 D （约占鲜体重的 0.04%-0.073%），以及钙和磷（约占鲜体重的 0.24%-0.188%） 等矿物质元素，所以蚯蚓可以作为家禽的饲料，是鸡鸭喜好的“肉类”食物；蚯蚓 体内含有地龙素，地龙解毒素，黄嘌呤，抗组织胺和维生素 B 等多种药用成分， 可作为很好的药用材料；此外，蚯蚓还在淡水钓鱼中适应面广，各种水域，鱼类， 212天津大学科技成果选编 气候都较适宜的钓饵。目前养殖蚯蚓，一般以牛粪，猪粪等动物粪便及稻草，沼 气和生活垃圾等为饲料，但这些资源或者数量少或者难以收集。 近年来，随着食用菌需求量的不断增加，以农作物秸秆和棉籽壳为培养基料 栽培生产食用菌技术发展迅速，并逐步形成规模化和产业化。而栽培各种食用菌 类后剩下的底料-菌糠，数量也大增。据测定，收菌后的菌糠，粗纤维降解 50%， 木质素降解 20%，而粗蛋白含量由原来的 2%提高到 6%-7%，脂肪含量增加 1-5 倍，而且易于粉碎，气味芳香，适口性好。此外，菌糠中还含有丰富的氨基酸， 多糖及铁钙锌镁等微量元素，以及一些代谢产物如微凉酚性物，少量生物碱，黄 酮，还含有肌酸多肽植物甾醇及三萜皂苷等化学物质。丢弃不仅浪费资源，而且 会造成环境污染。因此，菌糠是农业生产中很好的肥料原料，应充分加以利用。 技术原理与工艺流程简介： 1 对菌糠的前处理：将食用菌的废弃培养基菌糠粉碎，喷水搅拌，使其充分 湿润，且均匀，装入发酵罐内。 2 加入 40-50℃水使菌糠的含水量在 50%-60%，优选 55%，再用 80-85℃的 热空气灭菌 16-20 小时，优选 18 小时，降温至 30-40℃。 3 加入至少含有 1*108 个菌/克的菌粉，所述菌粉加入质量为菌糠干重的 1.0%-2.5%，所述菌粉为乳酸菌、芽孢杆菌和粉状毕赤酵母菌株至少一种。通入 30-40℃的空气，通空气量为 0.2-0.3L/min*kg 菌糠干重，通空气 24-36 小时，然 后密闭发酵 10-15 天，得到发酵产物，将所述发酵产物移除发酵罐，晾晒 1-2 天。 4 用草木灰和石灰粉调节 pH 为 6.0-7.0，既制成一种菌糠混合发酵制备的蚯 蚓饵料。 5 采取室内养殖蚯蚓，将制备的蚯蚓饵料均匀铺在 100*30*30cm 的木盆里， 厚度 10cm，铺好后，撒上适量的水，饵料的湿度保持在 50%-70%之间。将蚯蚓 均匀撒上，每平方米投放蚯蚓 500g，温度保持在 15-25℃。蚯蚓投放一天，观察 无异常反应，19 天可扩群一倍。 应用前景分析及效益预测： 213天津大学科技成果选编 本项目克服了现有蚯蚓养殖培养料资源缺乏和菌糠污染环境的不足，采用菌 糠混合发酵制备蚯蚓饵料为菌糠的综合利用及生产高附加值产品（蚯蚓）提供了 一条有效解决途径。 技术水平及专利与获奖情况： 已获得相关授权专利 应用领域：蚯蚓养殖企业，食用菌生产企业

研发阶段/n本发明的目的在于提供一种己酸菌ＧＫ１３菌株ＣＣＴＣＣＮＯ．Ｍ２０１０１７５。该菌株具有高产己酸及较好的生长稳定性特征，经强化功能菌后可用于制备高浓度复合己酸菌液，与应用于人工窖泥的培养，在实际生产中达到缩短新建窖池老熟周期与退化窖池功能复壮的效果，提高了出酒率和优品率，解决退化老窖池复壮及缩短新建窖池老熟时间等问题。

肠道菌群致病的“肠脑轴心”理论已经在肥胖、糖尿病、肿瘤等疾病中得到了越来越多的证实。我们的研究初步证实，肠道菌群在病原微生物感染、酒精成瘾等过程中，菌群种类、丰度会发生显著性变化，细菌自身以及代谢物可能在疾病的发生过程中具有关键性作用

本品是一种超浓缩、高活性、多菌种、多功能复合微生物制剂。它是有生命的活体肥料，它的作用主要靠它含有的大量有益微生物的生命活动来完成。公司采用国际尖端科技，使复合微生物有益菌在土壤及作物根表、根际以及体内定植、繁殖。在生产应用中具有以下显著特点：1.减少化肥用量高达30%--60%微生物经再增植后含有大量的固氮菌，可以大大提高土壤中的中微量元素含量，减少氮磷钾和其它中微量元素的施用量；同时含有多种高效活性有益微生物菌，增加土壤有机质，加速有机质降解转化为作物能吸收的营养物质，大大提高土壤肥力，减少化肥用量。 2.增产效果明显配方科学、营养全面，有机无机微生物三元相互促进，以肥养菌、以菌促肥，强根壮根、有效解决根系衰弱造成的养分吸收障碍，有效解决土壤养分不均衡问题，由于菌剂的代谢过程中释放出大量的无机有机酸性物质，促进土壤中微量元素硅、钙、铁、镁、钼等的释放及螯合，从而使作物增产高达20%—60%。改善作物和农产品的品质，使农民增收。

发酵过程具有高度非线性特点，以活细胞为培养对象的发酵过程具有时空多尺度特点，分 别在基因、代谢物分子尺度，细胞代谢尺度及反应器介尺度上相互作用和影响，要在此基础上 进行优化和放大具有非常大的难度，从而阻碍了我国生物发酵水平的提升。 本项目针对发酵过程的高度非线性及复杂性独创了多尺度参数相关分析理论与方法，通 过将发酵过程细胞内的微观生理代谢特性和反应器宏观生理特性相结合实现过程优化，而在工 业过程放大中则提出了生理特性和反应器流场特性相结合的放大方法，突破传统“实验室－小 试－中试－工业”逐级放大的思路与方法，实现工业发酵过程的定量设计与直接放大。

已有样品/n智能化红茶发酵装置，专利号201420382563.7。　　本实用新型公开了一种智能化红茶发酵装置，它包括发酵箱体、与发酵箱体连通的加热箱、与加热箱进气口连通的送风电机、与送风电机连通的超声波加湿装置、设置于加热箱上的控制电路、与加热箱出气口连通的抽风电机，加热箱一侧的外壁上设有显示屏、键盘和单片机系统板，加热箱内还设有发酵载物台、温湿度传感器、气压传感器、对流电机和辅助超声波加温装置，温湿度传感器和气压传感器均与单片机系统板连接，对流电机和辅助超声波加温装置均位于发酵载物台的下方，加热