已有样品/n本项目在已有的头孢菌素C酰化酶原始序列基础上，筛选出对头孢菌素C的活性和稳定性均有提高的新型突变体，并进行固定化研究。目前该固定化酶反应转化率可达99%以上，重复批次在200批左右，还有进一步提升空间。后续在该突变体基础上继续进行定向进化和固定化研究，进一步提高其反应活性和重复使用批次，以打破韩国的技术垄断，进一步降低国内7-ACA生产成本。在现有突变体基础上继续进行定向进化和固定化研究，以筛选到活性和稳定性更强的突变体。7-ACA目前为国内最大的抗生素原料之一，其全国总产量约为1500

本项目利用重组大肠杆菌异源表达来自枯草芽孢杆菌中的CAH基因，发酵生产头孢菌素脱乙酰酶蛋白。由于重组蛋白表达量高，采用简单的硫酸铵分级沉淀方法即可达到很好的纯化效果，极大程度地缩减了蛋白纯化的成本。在工业应用中，将游离酶固定在载体上可以实现多次重复利用，产物分离容易，可以连续操作。在众多固定化酶方法中，由于制备的固定化酶稳定性好，共价结合的方法在工业中最为常用。本项目采用共价结合的固定化方法，在温和条件下将游离酶连接在亲水性环氧基载体上，得到的固定化酶活力回收高，稳定性好，重复使用次数高。已完成整条工艺流程。重组大肠杆菌发酵生产CAH蛋白进入中试阶段，通过优化培养条件，发酵培养基等工作，降低生产成本，提高产酶量。目前完成的蛋白纯化及固定化酶制备工艺，对产品的性能已通过相关的实验得到很好的评价结果。在不断完善发酵和固定化酶制备工艺后，即可以进一步扩大生产试验规模，从而应用于工业生产。

一步酶法从头孢菌素 c（CPC） 生产 7－氨基头孢烷酸（ 7-ACA） 是继我们研发的两步酶法工艺成功应用于工1 成果简介一步酶法从头孢菌素 c（CPC） 生产 7－氨基头孢烷酸（ 7-ACA） 是继我们研发的两步酶法工艺成功应用于工业生产以后，在生产头孢菌素类抗生素医药中间体技术的又一个突破。与化学法和两步酶法相比，一步酶法有工艺简单、环保和转化率高、产品质量好等优点。该技术采用基因工程技术对 CPC 酰化酶（一步酶法用酶）的基因进行了改造，获得了能够高效催化 CPC 到 7-ACA 的突变基因。通过我们自己构建的高效启动子 HP 以及优化组合的调控表达元件，构建并筛选出了能够高效、高活性表达一步酶法用酶——CPC 酰化酶的基因工程细胞株。这是国内第一个使得 CPC 酰化酶活性能够达到工业应用水平的技术。由于采用了高效的表达系统和稳定的质粒，以及组成型表达结构，使得该基因工程菌遗传特性非常稳定，在发酵制酶的过程中不需要添加任何抗生素和诱导剂就可以实现高效、高活性表达。在高效表达 CPC 酰化酶的基础上，我们通过在表达基因上同时引入的特殊基因序列，使得蛋白的纯化和固定化工艺一步进行。通过自己开发研制的可重复使用的固定化载体，可以使得固定化酶活性达到 60U/g 以上。 采用我们研制的特异性纯化介质，可以从菌体破碎液中一步纯化和固定化 CPC 酰化酶，酶收率在 90 ％以上，固定化酶活达到 60U/g 以上。固定化酶可以重复使用 20 批以上，纯化和固定化用载体可以重复使用。2 技术指标菌 种：基因工程大肠杆菌，卡那抗性，组成型表达。 发酵温度： 37℃ 培 养 基：普通的大肠杆菌培养基，主要成分有玉米浆等廉价的营养源。 发酵周期： 20 小时 发酵酶活： 3U/ml 以上（ 5 升发酵罐） 特 点：遗传特性稳定，不需要添加诱导剂和抗生素，工艺简单。3 合作方式小试技术转让或合作进行中试。4 所属行业领域医疗卫生。业生产以后，在生产头孢菌素类抗生素医药中间体技术的又一个突破。与化学法和两步酶法相比，一步酶法有工艺简单、环保和转化率高、产品质量好等优点。该技术采用基因工程技术对 CPC 酰化酶（一步酶法用酶）的基因进行了改造，获得了能够高效催化 CPC 到 7-ACA 的突变基因。通过我们自己构建的高效启动子 HP 以及优化组合的调控表达元件，构建并筛选出了能够高效、高活性表达一步酶法用酶——CPC 酰化酶的基因工程细胞株。这是国内第一个使得 CPC 酰化酶活性能够达到工业应用水平的技术。由于采用了高效的表达系统和稳定的质粒，以及组成型表达结构，使得该基因工程菌遗传特性非常稳定，在发酵制酶的过程中不需要添加任何抗生素和诱导剂就可以实现高效、高活性表达。在高效表达 CPC 酰化酶的基础上，我们通过在表达基因上同时引入的特殊基因序列，使得蛋白的纯化和固定化工艺一步进行。通过自己开发研制的可重复使用的固定化载体，可以使得固定化酶活性达到 60U/g 以上。 采用我们研制的特异性纯化介质，可以从菌体破碎液中一步纯化和固定化 CPC 酰化酶，酶收率在 90 ％以上，固定化酶活达到 60U/g 以上。固定化酶可以重复使用 20 批以上，纯化和固定化用载体可以重复使用。

一步酶法从头孢菌素c（ CPC） 生产7－氨基头孢烷酸（7-ACA） 是继我们研发的两步酶法工艺成功应用于工业生产以后，在生产头孢菌素类抗生素医药中间体技术的又一个突破。与化学法和两步酶法相比，一步酶法有工艺简单、环保和转化率高、产品质量好等优点。该技术采用基因工程技术对 CPC 酰化酶（一步酶法用酶）的基因进行了改造，获得了能够高效催化 CPC 到 7-ACA 的突变基因。通过我们自己构建的高效启动子 HP 以及优化组合的调控表达元件，构建并筛选出了能够高效、高活性表达一步酶法用酶——CPC 酰化酶的基因工程细胞株。这是国内第一个使得 CPC 酰化酶活性能够达到工业应用水平的技术。由于采用了高效的表达系统和稳定的质粒，以及组成型表达结构，使得该基因工程菌遗传特性非常稳定，在发酵制酶的过程中不需要添加任何抗生素和诱导剂就可以实现高效、高活性表达。在高效表达 CPC 酰化酶的基础上，我们通过在表达基因上同时引入的特殊基因序列，使得蛋白的纯化和固定化工艺一步进行。通过自己开发研制的可重复使用的固定化载体，可以使得固定化酶活性达到 60U/g 以上。 采用我们研制的特异性纯化介质，可以从菌体破碎液中一步纯化和固定化 CPC 酰化酶，酶收率在 90 ％以上，固定化酶活达到 60U/g 以上。固定化酶可以重复使用 20 批以上，纯化和固定化用载体可以重复使用。

头孢洛宁(Cefalonium、Cephalonium)是美国先灵葆雅制药公司在英联邦国 家内开发的奶牛枯奶期针对乳房炎的预防性用药，属于第二代头孢菌素类药物， 具有长效广谱抗菌作用。是全球三个指定的动物专用头孢类抗生素。该药主要 在欧盟及英联邦国家范围内使用，我国鲜有进口或开发报道。由于使用范围相 对小，前几年该药的生产开发并未引起国内原料药厂家的重视，去年以来，头 孢洛宁下游行业进入新一轮景气周期从而带来头孢洛宁市场需求的膨胀，头孢 洛宁行业的销售上升明显，供求关系得到改善，行业盈利能力稳步提升。同时， 217 在国家“十二五”规划和产业结构调整的大方针下，头孢洛宁面临巨大的市场投 资机遇，行业有望迎来新的发展契机。

性状 本品为白色或类白色粉末，微溶于水，略溶于乙醇。 应用剂型 盐酸头孢噻呋注射液 产品参数

【成份】 本品主要成分为头孢地尼。 【性状】 本品内容物为淡黄色或黄色粉末或颗粒。 【功能主治】 对头孢地尼敏感的葡萄球菌属、链球菌属、肺炎球菌、消化链球菌、丙酸杆菌、淋病奈瑟氏菌、卡他莫拉菌、大肠埃希菌、克雷伯菌属、奇异变形杆菌、普鲁威登斯菌属、流感嗜血杆菌等菌株所引起的下列感染： ·咽喉炎、扁桃体炎、急性支气管炎、肺炎； ·中耳炎、鼻窦炎； ·肾盂肾炎、膀胱炎、淋菌性尿道炎； ·附件炎、宫内感染、前庭大腺炎； ·乳腺炎、肛门周围脓肿、外伤或手术伤口的继发感染； ·毛囊炎、疖、疖肿、痈、传染性脓疱病、丹毒、蜂窝组织炎、淋巴管炎、甲沟炎、皮下脓肿、粉瘤感染、慢性脓皮症； ·眼睑炎、麦粒肿、睑板腺炎 【规格】 按C18H19N3O5S计0.25g。

头孢喹肟 是目前唯一一个动物专用第四代头孢类抗生素，具有抗菌谱广， 抗菌活性强的特点，适用于非肠道用药。 头孢喹肟对 β-内酰胺酶高度稳定。其内在抗菌活性强于第三代头孢菌素头 孢噻呋。与第三代头孢相比，四代头孢的血浆半衰期长，无肾毒性。该产品有 很强的抗菌活性，其对金葡菌、链球菌、铜绿假单孢菌、肠细菌科（大肠杆菌、 沙门氏菌、克雷伯氏菌、柠檬酸菌、粘质沙雷菌）都有极强的杀灭作用，对许 多耐甲氧西林的葡萄球菌及肠杆菌也有良好的杀灭作用。抗菌谱广，抗菌活性 强，适于非肠道给药。 在临床应用中，头孢喹肟主要应用于敏感细菌引起的猪、牛的呼吸系统感 染及奶牛乳房炎及母猪的无乳综合症的临床治疗。

硫酸多粘菌素b是由多粘芽胞杆菌（bacillus polymyxa）产生的一组多肽类抗生素。随着硫酸多粘菌素b在医药领域的广泛应用，而且具有较低的毒性及良好的抗菌活力，这种产品在全世界的开发己成热潮。但由于肾毒性和神经毒性，多粘菌素B的应用受到限制，而被疗效好、毒性低的其他抗生素所取代。但是由于目前革兰氏阴性菌耐药性的产生，多粘菌素B又重新得到重视，然而该产品目前在我国的产量很小，市场极不饱和，国内市场缺口较为严重。日本首先实现发酵法生产多粘菌素B的工业化生产，是世界上最早也是最主要的多粘菌素B生产国，其效价最高可达到2.0g/L。使用多粘菌素B生产制剂的企业较多，例如:北京永光制药、福建省三明制药厂、上海第一生化药业等，制剂企业采用的原料全部进口，因此，在我国加快开发生产这种市场前景极好的产品己成为当务之急。

头孢尼西药物是目前普遍适用于抗感染的一线药物，适用于敏感菌引起的下呼吸道感染、尿路感染、败血症、皮肤软组织感染、骨和关节感染等，也用于手术预防感染。在外科手术前单剂量注射1g 头孢尼西，可以减少由于手术过程中污染或潜在的污染而导致的术后感染发生率。在剖腹产手术中使用头孢尼西（剪断脐带后）可以减少某些术后感染发生率。该药应用广泛，市场需求量大。北京化工大学开发了头孢尼西药物的合成新工艺，希望和企业合作进行工业化开发。产品质量可以达到相应国家标准。应用在医药领域和头孢类药物生产企业。市场前景广阔。适合中型企业投资，主要设备为反应和分离设备，总投资额100万左右。合作方式可采用技术开发。 头孢尼西为第二代广谱、长效的头孢类抗生素,通过抑制细菌细胞壁合成产生抗菌活性。对革兰氏阳性和阴性菌以及一些厌氧菌均有抗菌作用,对大多数B-内酰胺酶稳定。本技术对7-ACA为原料的两条合成路线进行了比较,发现对7-ACA的3-位修饰比较适合工业化应用。本技术通过对诸多缩合剂进行比较，然后对7-ACA的7-为位进行酰化反应,之后再经过酸性水解,盐析,与N,N-二环己亚乙基胺成盐,再经过强酸性阳离子交换树脂交换,最后与甲醇钠反应生成目标产品头孢尼西钠。产品总的收率为53%。经HPLC检测产品纯度可以达到99%.符合工业化生产的要求。并且最终产品也经过核磁共振氢谱检验正确。以亚硫酸氢钠、甲醛、氨水为起始原料,经过缩合,环化等一系列步骤制得头孢尼西的中间体1-磺酸甲基-5-巯基四唑双钠盐(又名1-磺甲基四氮唑-5-硫醇双钠盐)；产品颜色很好,收率达到30%左右。