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基于CRISPR/Cas9基因编辑系统的载体组合及其应用
01.成果简介 CRISPR/Cas9是细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统。其工作原理是crRNA通过碱基配对与tracrRNA结合形成tracrRNA/crRNA复合物，此复合物引导核酸酶cas9蛋白在与crRNA配对的序列靶位点剪切双链DNA。经过研究，通过人工设计tracrRNA/crRNA，改造形成具有引导作用的sgRNA，可以引导Cas9蛋白在多种细胞的特定基因组位点上进行切割、修饰，并最终实现基因突变、插入或缺失。因此，CRISPR/Cas9系统已经被广泛应用于基因编辑技术领域。 近年来，CRISPR/Cas9基因编辑系统在真核生物和原核生物中得到了广泛的应用。在大肠杆菌等革兰氏阴性菌中，用一个载体表达cas9基因，同时由于革兰氏阴性菌重组效率低，需要在这个载体上表达λ-RED重组酶；在另一个载体中表达sgRNA和用于同源重组的同源臂序列。两个载体都转入大肠杆菌中时，sgRNA介导Cas9蛋白切割基因组上特定序列，形成双链断裂，刺激同源重组的发生，从而实现基因编辑。 本项成果构建了适用于盐单胞菌的基于CRISPR/Cas9的基因编辑系统。该系统由两个载体组成：第一个载体表达Cas9基因，且不需要表达λ-RED重组酶，实际操作中不再需要诱导λ-RED重组酶的表达，简化了步骤流程；第二个载体表达sgRNA，并含有用于同源重组的同源臂序列。从而实现了基因编辑。本项成果的技术优势包括： （1）基因编辑时间由原有的20余天缩短到7-8天； （2）N个基因编辑时间由原有的N个月缩短到3+5N天； （3）无需表达λ-RED重组酶。 图1 盐单胞菌TD01进行基因编辑的流程示意图02.应用前景 本项成果可作为CRISPR/Cas9基因编辑系统的载体，广泛应用于基因编辑领域。03.知识产权 本项成果已申请1项发明专利。04.团队介绍 本项目为多团队合作项目，其中一个团队的负责人为清华大学教授，博士生导师，长江学者特聘教授，国家杰出青年基金获得者。主要研究方向为合成生物学、微生物代谢工程、生物材料、工业生物技术。已发表国内外高水平学术论文数十篇，申请专利70余项。05.合作方式 投融资。06.联系方式邮箱：zhangxinrui@tsinghua.edu.cn
清华大学
2021-04-13
种养耦合及其废弃物循环利用关键技术转化应用
上海交通大学
2021-04-13
碱菀酯A及其衍生物的制备和医药用途
本发明提供从碱菀植物的全草中提取分离碱菀酯A以及合成碱菀酯A及其衍生物的制备方法。碱菀酯A和碱菀酯A的衍生物显著抑制人脑胶质瘤U87-MG和U251细胞以及肠癌HCT-15和SW620细胞的增殖，并诱导肿瘤细胞凋亡，可在制备治疗肿瘤药物中的应用。碱菀酯A和它的衍生物对肿瘤细胞的作用并不仅局限于胶质瘤和肠癌，还包括其他各种肿瘤和癌症。
浙江大学
2021-04-13
一种色满化合物及其提取方法和应用
本发明公开了一种色满化合物及其提取方法和应用。所述色满化合物为R?3?methyl?6, 8?dihydroxy?7?methyl?3, 4?dihydroisochromen?1?one(R?3?甲基?6, 8?二羟基?7?甲基?3, 4?二氢色满?1?酮)。该化合物的提取方法为：将地鳖虫置于有机溶剂中浸提，得到浸提液，将浸提液浓缩后加水制备水混悬液；对水混悬液进行萃取，将萃取液浓缩，获得浸膏；从浸膏中分离纯化得到所述色满化合物。本发明从地鳖虫中分离鉴定了一种具有新颖结构的色满化合物，具有广泛的药理活性，能用于制备抗肿瘤药物或肿瘤预防保健食品、抗酪氨酸酶药物或美白化妆品
浙江大学
2021-04-13
一种改型的开式轴流风扇叶及其改型方法
本发明公开了一种改型的开式轴流风扇叶及其改型方法，其中改型的开式轴流风扇叶用于绕扇叶旋转轴旋转，该改型开式轴流风扇叶的叶轮尾缘在垂直于扇叶旋转轴的平面上的投影曲线包括非均匀有理 B 样条曲线(7)；优选的非均匀有理 B 样条曲线(7)包括至少六个控制点。本发明通过对开式轴流风扇叶中关键的叶轮尾缘的结构及其设置方式(包括各个控制点的选取，如控制点对应的半径、角度等)进行改进，与现有技术相比能够有效解决低压轴流风扇效率低、功耗大、耗材多的问题，并且改型后的叶轮气动性能变化极小，但叶轮功率却有较大的降低，产业应用效果好，尤其适用于各种空调外机系统中的轴流风扇叶。
华中科技大学
2021-04-13
一种具有保肝作用的化合物及其应用
【发 明 人】陶伟伟；段金廒；唐于平【摘要】本发明公开了一种具有保肝作用的新皂苷化合物。本发明通过对甘草化学成分进行系统深入研究，经过波谱和质谱数据分析表明从甘草根中分离得到一个新的三萜皂苷化合物。经过药理实验研究表明，本发明提供的三萜皂苷化合物，可显著降低CCl<sub>4</sub>致肝损伤模型小鼠、乙醇致肝损伤模型小鼠，D-氨基半乳糖致肝损伤模型小鼠血清ALT、AST活性及肝组织MDA含量，增强肝脏SOD活性，对肝损伤具有明显的保护作用，且经过毒性实验研究表明，本发明提供的具有保肝作用的新皂苷化合物未见显著毒性，可望开发成新的保肝作用的药物或保健品。
南京中医药大学
2021-04-13
一种钙钛矿太阳电池及其制备方法
本发明公开了一种钙钛矿太阳电池及其制备方法，该太阳电池 自下而上依次包括，透明电极、介孔 p-i-n 结构框架和对电极，其中所 述的介孔 p-i-n 结构框架由 n 型半导体层、绝缘层和 p 型半导体层依次 层叠构成，所述 n 型半导体层、所述绝缘层和所述 p 型半导体层均包 含介孔，所述 n 型半导体层、绝缘层、p 型半导体层的介孔内均填充 有钙钛矿材料。其制备方法依次包括：在透明导电基底上通过旋涂法 或丝网印刷法
华中科技大学
2021-04-14
一种用于动态无线充电的装置及其参数获取方法
本发明公开了一种用于动态无线充电的装置及其参数获取方法， 包括能量发射模块和能量接收模块；能量发射模块包括依次连接的高 频逆变单元、LC 滤波单元、第一补偿单元和功率发射线圈；高频逆变 单元将直流源转换为高频交流电，经过 LC 滤波和第一补偿单元的调节后，以高频磁场耦合方式发射能量；能量接收模块包括依次连接的 功率接收线圈、第二补偿单元和不控整流单元，将接收的高频交流电 转换为直流供给负载。本发明能够根据功率线圈的互感耦合程度自动 地调节原边功率线圈电流，从而获得保持稳定输出功率的特性，适用 于宽偏
华中科技大学
2021-04-14
一种非易失性内存系统及其管理方法
本发明公开了一种非易失性内存系统及其管理方法，利用非易 失 PCM 存储器件构建非易失性内存，并在主机内存管理模块中添加对 非易失内存的管理，实现非易失内存与传统 DRAM 内存的统一管理， 能与传统 DRAM 内存融合组成统一的内存供主机处理器访问。本发明 可以解决传统 DRAM 内存的掉电数据丢失的问题、数据一致性等问 题，同时还能降低主机内存的能耗。
华中科技大学
2021-04-14
一种温敏型水性聚氨酯粘胶剂及其制备方法
本发明涉及一种温敏型水性聚氨酯胶粘剂及其制备方法，主要用于电子器件粘接组装领域。本发明采用结晶型聚酯二元醇与脂肪族异氰酸酯反应，并引入亲水组份和环氧树脂，得到一种温敏型水性聚氨酯胶粘剂。该胶粘剂在应用温度区间内有一开关温度（Switch Temperature, Ts），其粘接强度在开关温度前后表现出温度响应特性，在开关温度以下对电子器件具有良好的粘接性；当加热到开关温度以上时，粘接强度明显降低，使得电子器件可以轻易被拆除。这会给电子器件（特别是精密贵重电子器件）的拆卸、组装、更换、回收利用带来极大便利。因而本发明的温敏型水性聚氨酯胶粘剂在电子器件粘接组装领域具有广阔的应用前景。
四川大学
2016-10-08