本发明成功将 EAMM 蛋白和抗原 HspX 在基因水平进行融合构 建了新的融合蛋白 EAMMH，并将该不带标签的融合蛋白成功进行表 达和纯化。EAMMH 融合蛋白以可溶形式表达，明显改善了 EAMM 以包涵体进行表达的状况。此外，EAMMH 蛋白融合了结核分枝杆菌 主要的生长期抗原和休眠期抗原，并可诱导较强的针对各期抗原的特 异性细胞免疫和体液免疫应答。小鼠结核分枝杆菌气雾攻击模型证 明，该新的融合蛋白疫苗具

现有伴随诊断主要是基因检测，而基因突变并不等于蛋白质表达，更不意味着靶点激活。本项目基于蛋白组学，特异性捕获磷酸化酪氨酸激酶（最主要靶点），直接检测靶点激活状态，极低成本为肿瘤用药提供最精准指导。

本发明涉及一种新型的G蛋白偶联受体(GPCR)细胞水平筛选系统及其构建方法与应用。所述筛选系统由HEK293细胞或CHO细胞构建，含有来自以下序列中不同组间基因序列构建的2种融合表达载体：第1组：(1)DnaE基因的C端与报告基因的C端的拼接序列：DnaE-C-Report-C，(2)DnaE基因的N端与报告基因的N端的拼接序列：Report-N-DnaE-N；第2组：①GPCR基因，②β-arrestin基因。本发明的有益效果主要体现在：应用本发明筛选系统进行G蛋白偶联受体(GPCR)细胞水平筛选，灵敏度高、特异性强，操作简单、快速，检测范围广，对任何靶细胞型中任何GPCR或GPCR信号转导途径的激动剂、拮抗剂都可以筛选。

本发明成功将EAMM蛋白和抗原HspX在基因水平进行融合构建了新的融合蛋白EAMMH，并将该不带标签的融合蛋白成功进行表达和纯化。EAMMH融合蛋白以可溶形式表达，明显改善了EAMM以包涵体进行表达的状况。此外，EAMMH蛋白融合了结核分枝杆菌主要的生长期抗原和休眠期抗原，并可诱导较强的针对各期抗原的特异性细胞免疫和体液免疫应答。

真菌疏水蛋白具有自我装配成膜的性质，因此 （1）疏水蛋白可作为蛋白和细胞固定化的媒介，可用于生物传感器和生物芯片，作为引发层，交联上配体或形成融合蛋白，能使特定分子固定化到特定表面。 （2）它能改变表面的属性，保护表面。可用于提高医学器官移植物生物相容性和防止微生物细胞粘附；可应用于医药行业中烧伤、创伤的创面保护，为临床病人创面保护和恢复提供一种安全无毒、操作简便、高效低耗的新手段。 （3）作为一种生物表面活性剂，疏水蛋白还可以用于促进土壤中的污染物的降解和应用在石油泄漏后回收石油的过程中。 （4）疏水蛋白具有表面活性，可用于食品对抗相变能力并形成稳定泡沫，使其在密封食品生产上发挥重要作用； （5）也可用于日用化妆品生产中，因疏水蛋白可以作为洗洁产品的成分，根据其疏水、亲水两相间的转变，可通过自我装配而将面部的油脂等疏水的成分包裹起来，再用水清洗将其除去，也可以作为保护秀发的天然膜，使发部维持清洁并保持一定水分；将它运用到面部的美容护理，由于它的特性，能使皮肤表面形成一层天然生物活性保护膜，起到皮肤保湿、免受外界空气中污浊物的侵害，从而达到护肤美容之功效。 （6）疏水蛋白直接包裹药物以改变药物溶解性并实现控、缓释。通过真菌疏水蛋白与难溶于水的药物混合，可以达到良好的分散效果，并延长了两种药物的药效持续时间。 （7）真菌疏水蛋白与其他的功能性蛋白或小肽组成融合蛋白，同时发挥疏水蛋白的稳定吸附材料表面的特性和功能性蛋白或小肽的特异性功能，如在组织工程、抗炎抗菌材料等。 项目特色： 纯天然生物制品，无毒害，无污染。耐酸碱，抗相变能力强。自我装配形成有活性的蛋白膜。具有良好的热稳定性和透气不透水性。由于它的特性，使得它具有：（1）自动成膜，无需贴敷，使用便利；（2）透气性优良；(3)纯天然无化学添加成分，瑞氏木霉已被证明是安全的菌种；（4）组织相容性好，避免了严重的排异反应；（5）耐高温（100 摄氏度仍保持活性），易于消毒；（6）稳定不降解，便于产品的长期保存；（7）用表面活性剂就可以很容易地清洗（8）延展性好，1 毫克的疏水蛋白在液面就可以展开 1 平方米的薄膜（9）透明，可直接透过成膜观察（10）性价比高。 市场应用前景： 目前国际上尚未实现疏水蛋白的工业化生产，其相关应用产品的开发更为滞后。我们在已实现疏水蛋白中试研发的基础上，扩大发酵规模，进行后续产品的开发，我们的技术和工艺现居国际领先地位，无疑会占有宝贵的先机。 疏水蛋白产品将作为新一代膜生物活性材料进入市场，它的出现将会革命性地取代现有化学产品，这无疑给人类的健康带来了很大的益处，消除人类在预防和治疗疾病、食品加工、以及医学检测、食物保鲜方面为健康做出努力的同时给自身带来的潜在危害，而且价格更为低廉。因此，本项目大规模生产疏水蛋白及其应用开发是有非常广阔的市场前景的，并且我们的技术在国际和国内市场处于领先地位。这些产品都将在国际市场上处于最优竞争状态。

本发明提供了一种重组抗菌黏附纤维蛋白及其制备方法和应用。本发明根据芽孢杆菌密码子偏好性优化合成重组抗菌黏附纤维蛋白的基因，采用多片段重组方法实现抗菌黏附消炎纤维蛋白的功效；本发明生产的重组抗菌黏附纤维蛋白可广泛应用于医疗领域的创伤敷料、手术止血材料、组织工程材料、医疗器械涂层，医美领域的皮肤修复产品、注射填充材料，生物材料领域的细胞培养基、抗菌涂层，以及慢性炎症治疗、药物载体等。本发明所述的重组抗菌黏附纤维蛋白具有可高效生产、低成本、产品纯度高、生物活性好等优点，满足了医疗、医美、生物材料等领域对抗菌消炎功能材料的迫切需求，具有广阔的应用前景和市场价值。

以主要的植物源性蛋白饲料原料为研究对象，针对原料的营养价值特性，系统建立抗营养因子高效降解菌株的筛选方法，借鉴现代发酵工程的优化理论，建立有益代谢产物的检测与控制和发酵参数相关的优化研究方法，确立规模化生产工艺并进行关键设备的选型，制造品质稳定可靠的发酵蛋白饲料，并建立相关产品的质量指标体系，为缓解我国蛋白饲料资源紧张提供现实可行的方法，实现我国饲料及养殖工业的健康持续发展。 

项目简介 目前临床上抗哮喘用药主要包括糖皮质激素类药物与β2受体激动剂（例如盐酸丙卡特罗（美普清）），但这两类药物存在较大的副作用。糖皮质激素类药物可引起水、盐、糖、蛋白质及脂肪代谢紊乱；减弱机体抵抗力，阻碍组织修复，延缓组织愈合；抑制儿童生长发育。β2受体激动剂可引起心律失常、肌肉震颤、水盐代谢紊乱。临床急需疗效确切、副作用小的新药。 气道高反应性是指气管、支气管本身对各种刺激，包括特异性抗原刺激和非特异性刺激，如物理、化学刺激，呈现过度反应，是支气管哮喘病人区别于正常人的重要特征。CD38分子表达与分布在气道平滑肌等。通过CD38分子的酶催化作用生成的环腺苷二磷酸核糖(cyclic adenosine diphosphate ribose, cADPR)来调节细胞内Ca2+的释放而调节细胞收缩。气道平滑肌的收缩能力主要依靠于平滑肌细胞内Ca2+的浓度，CD38分子可以调节细胞内Ca2+的浓度进而影响气道平滑肌的收缩，在哮喘的发病机制中起到非常重要的作用。图1.T化合物的化学结构   本项目重点研究了两种小分子CD38抑制剂，其中一种化合物即5-(3-苯基丙酰氨基)-N-(4-乙氧羰基苯基)-1H-3-吲哚甲酰胺（T化合物分子式见图1）治疗能够减轻臭氧攻击所造成气道与肺泡病理改变，炎症反应、氧化损伤及气道高反应，且无明显血液毒性与全身性毒副作用。该化合物作为CD38酶抑制剂，可通过抑制Ca2+释放舒张气管平滑肌，对症治疗气道高反应性疾病；我们利用臭氧制作小鼠气道高反应模型，同时给予该化合物的乳化剂灌胃治疗，发现经该化合物治疗的小鼠气道阻力明显降低（见表1）、动态肺顺应性明显增加、肺病变程度减轻（见图2）。  应用范围 流行病学结果表明，中国有大约3000万哮喘病人。其中，儿童哮喘发病率约1.5%，成人发病率约1.24%。由于哮喘发病率不断地增高，预计在未来15-20年内患者总人数将增至4亿人。T化合物可以有效治疗哮喘病人气道高反应症状、副作用小，具有良好的药物开发前景，我国每年有超过3000万人出现哮喘发病，假设仅仅5%的病人（150万）接受5000元的抗哮喘治疗，则年销售额可望达到75亿元。 表1 ＊P<0.05 vs 正常对照组   ＃ P<0.05 vs 模型组项目阶段 本项目处于临床前阶段。化合物合成路线合理，产率高。适合产业化。我们的研究发现，5-(3-苯基丙酰氨基)-N-(4-乙氧羰基苯基)-1H-3-吲哚甲酰胺除了能通过抑制CD38酶活性，扩张气管平滑肌对症治疗气道高反应性疾病之外，还具有抗炎、抗氧化作用，未发现明显毒副作用。   图2.各组小鼠肺组织病理切片HE染色图左上，正常对照组；中上，模型组；右上，阳性药1激素组；左下，阳性药2美普清组；中下，H化合物组；右下，T化合物组知识产权 已经获得发明专利授权。合作方式 技术转让。

目前临床上抗哮喘用药主要包括糖皮质激素类药物与β2受体激动剂（例如盐酸丙卡特罗（美普清）），但这两类药物存在较大的副作用。糖皮质激素类药物可引起水、盐、糖、蛋白质及脂肪代谢紊乱；减弱机体抵抗力，阻碍组织修复，延缓组织愈合；抑制儿童生长发育。β2受体激动剂可引起心律失常、肌肉震颤、水盐代谢紊乱。临床急需疗效确切、副作用小的新药。 气道高反应性是指气管、支气管本身对各种刺激，包括特异性抗原刺激和非特异性刺激，如物理、化学刺激，呈现过度反应，是支气管哮喘病人区别于正常人的重要特征。CD38分子表达与分布在气道平滑肌等。通过CD38分子的酶催化作用生成的环腺苷二磷酸核糖(cyclic adenosine diphosphate ribose, cADPR)来调节细胞内Ca2+的释放而调节细胞收缩。气道平滑肌的收缩能力主要依靠于平滑肌细胞内Ca2+的浓度，CD38分子可以调节细胞内Ca2+的浓度进而影响气道平滑肌的收缩，在哮喘的发病机制中起到非常重要的作用。 本项目重点研究了两种小分子CD38抑制剂，其中一种化合物即5-(3-苯基丙酰氨基)-N-(4-乙氧羰基苯基)-1H-3-吲哚甲酰胺（T化合物分子式见图1）治疗能够减轻臭氧攻击所造成气道与肺泡病理改变，炎症反应、氧化损伤及气道高反应，且无明显血液毒性与全身性毒副作用。该化合物作为CD38酶抑制剂，可通过抑制Ca2+释放舒张气管平滑肌，对症治疗气道高反应性疾病；我们利用臭氧制作小鼠气道高反应模型，同时给予该化合物的乳化剂灌胃治疗，发现经该化合物治疗的小鼠气道阻力明显降低（见表1）、动态肺顺应性明显增加、肺病变程度减轻（见图2）。

复合铁酶促活性污泥强化污水生物脱氮除磷技术从改进生物脱氮除磷活性污泥絮体结构为切入点，采用人工调控技术手段，强化铁离子在电子传递体系中电子传递作用与酶促反应的激活剂作用，提高脱氮除磷微生物的生化反应代谢活性与适应外界环境因素变化的能力，提高生物脱氮除磷效率，解决污水生物脱氮除磷系统存在的固有矛盾与瓶颈问题。       该技术不仅大大提高生化反应系统微生物活性（DHA、ETS 与 SOUR 分别提高 30%左右），而且提高了城市污水脱氮除磷效率与系统运行稳定性，与普通活性污泥生物脱氮除磷系统相比较，其生物脱氮与除磷效率分别可提高10%、25%左右，特别在解决低温硝化影响问题上具有突破性进展，系统抗低温能力得到明显增强（在反应温度 10℃条件下，系统硝化效率可以保持 70%以上，同时除磷效率达到 90%）。