本发明公开了一种体外长期稳定培养鸡胚胎干细胞的方法。本发明提供了鸡胚胎干细胞的体外培养基，为在基础培养基中添加碱性成纤维细胞生长因子、干细胞因子和白血病抑制因子得到的培养基；所述碱性成纤维细胞生长因子、所述干细胞因子和所述白血病抑制因子在所述体外培养基的配比为1:1:1。本发明首次利用可传代的鸡胚成纤维细胞系DF‑1细胞系作为饲养层，通过外源添加人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF),重组小鼠干细胞因子(mSCF)和人白血病抑制因子(hLIF)三种细胞因子，从而可以实现在体外长期、稳定培养鸡胚胎干细胞且维持其自我更新能力。

揭示了转录因子Sox2同时结合DNA和RNA并协同调控体细胞重编程的新机制，着重强调了在体细胞重编程过程中Sox2与RNA的直接相互作用的功能。通过PAR-CLIP和RNA SELEX确认了Sox2与RNA直接相互作用，进一步的测序分析发现Sox2偏好性结合一个CCCY核心基序和一个CGCG的二级基序。随后，研究人员利用EMSA和RNA免疫沉淀（RNA-immunoprecipitation assay）等手段确定了Sox2的RNA结合结构域（RBM），该结构域具有优先结合富含GC的RNA序列的特征。另外，通过RNA fishing实验和竞争性结合实验等的进一步分析，发现在DNA和RNA共同存在的情况下，Sox2使用其HMG结构域结合同源DNA序列，并同时利用RBM结构域在体外介导三元RNA/Sox2/DNA复合物的形成。除此之外，通过比较Oct4、Klf4、c-Myc (OKM)“鸡尾酒”以及不同Sox2突变体诱导下iPSC生成的效率发现，删除Sox2 的RBM结构域会影响iPSC的生成，并且显著地改变了体细胞重编程过程中的选择性剪接事件。       该研究加深了人们对Sox2蛋白调控多能性重编程机制的理解，进一步阐明了DRBPs对RNA代谢的调控机制。

本发明涉及生物质能利用技术，旨在提供一种超声波改变湿藻细胞分形结构促进油脂萃取的方法。该方法包括：收获分形维数为1.21～1.24、细胞壁厚度为0.07～0.08μm的湿藻，然后进行超声波辐照改性，控制超声波辐照功率和时间使湿藻中细胞的分形维数上升为1.46～1.51，细胞壁厚度减小为0.04～0.06μm；向处理后的湿藻中加入萃取剂，进行油脂萃取；所述湿藻细胞是指含水率在10～90％的微藻细胞的集合体。本发明利用超声波改变湿藻细胞分形结构促进油脂萃取，省去了传统方法中湿藻细胞的脱水干燥等高能耗步骤，通过提高藻细胞分形维数和降低细胞壁厚度，使萃取剂对细胞内油脂的萃取效率提高到85-90％。

本实用新型公开了一种具有三维表面微结构的细胞培养装置。包括载片、壳体、微结构和微流道系统；壳体置于载片上，壳体底面开口并在开口周围与载片相封接形成作为细胞培养室的内腔，细胞培养室内设有微结构和微流道系统，微结构贴附在载片上，微流道系统包括进口、出口和微流道，微流道设置在微结构周围的壳体内底面或者载片上表面，进口和出口设置在微结构两侧的壳体上，进口和出口分别经各自的微流道连通细胞培养室中的微结构。本实用新型装置能模拟细胞分布规律的培养环境，减少细胞接触抑制，具有操作简单，细胞植入便捷等特点，能实现快速、高效的细胞培养。

先天发育畸形、肿瘤切除、创伤、难愈性伤口等因素导致的软组织缺损对患者的外形容貌、生活质量等都有严重影响；由于具有来源丰富、取材方便、安全可靠、成本低廉、无免疫排斥反应等优点，自体脂肪移植至今仍然是软组织缺损修复和重建的常用方法。然而，脂肪移植的远期吸收率较高，可达60%以上，这极大地影响了软组织修复的远期疗效，从而限制了脂肪移植在临床的广泛应用。研究表明，移植脂肪组织吸收率较高的原因主要有微循环不能及时建立导致早期血供不足，组织中脂肪细胞凋亡、去分化等导致成熟脂肪细胞数目减少。近年来，随着细胞治疗的出现，越来越多的研究将干细胞应用于脂肪移植。脂肪干细胞（Adipose-derived stem cells, ASCs)是较理想的可应用于脂肪再生和脂肪移植的种子细胞。富血小板血浆（platelet-rich plasma, PRP）是全血经过多次差速离心后的产物。除了高浓度的血小板，PRP激活后还可释放多种、大量的对细胞增殖、组织修复与再生等具有重要作用的生长因子。因此，越来越多的研究将PRP应用于组织修复和再生。针对脂肪移植后成活率低的问题，考虑到ASCs和PRP的诸多优势，本项目致力于研究了PRP复合ASCs对脂肪移植的影响，并进一步探索获得PRP促进脂肪移植存活的最佳用量等基础数据，有望为临床自体脂肪移植技术的改进提供了参考。

已成功构建Ad-GDF-5和Ad-GFP；已成功构建小肠粘膜下层和壳聚糖－聚己酸内酯支架；目前已完成动物椎间盘退变模型的制作，间充质干细胞的提取，分离，培养和鉴定；已制备转基因MSCs，完成转基因MSCs的细胞特性，其和支架之间的相互影响。

本发明公开了乳酸菌静息细胞发酵生产γ-氨基丁酸（GABA）工艺，利用经过诱导的乳酸菌活性静息细胞体，分散于含有底物的转化缓冲液中，在合适的条件下转化生产γ-氨基丁酸。利用该方法可以大幅度缩短转化时间，提高转化效率，产物成份简单，利于分离提纯。且转化无需无菌条件，设备要求简单，耗能低。经条件优化，本工艺已适合工业化生产。附图说明：附图2为pH对乳酸菌株的生长与发酵生产GABA的影响(▼生长影响；▲发酵影响)。

本发明涉及一种新型的G蛋白偶联受体(GPCR)细胞水平筛选系统及其构建方法与应用。所述筛选系统由HEK293细胞或CHO细胞构建，含有来自以下序列中不同组间基因序列构建的2种融合表达载体：第1组：(1)DnaE基因的C端与报告基因的C端的拼接序列：DnaE-C-Report-C，(2)DnaE基因的N端与报告基因的N端的拼接序列：Report-N-DnaE-N；第2组：①GPCR基因，②β-arrestin基因。本发明的有益效果主要体现在：应用本发明筛选系统进行G蛋白偶联受体(GPCR)细胞水平筛选，灵敏度高、特异性强，操作简单、快速，检测范围广，对任何靶细胞型中任何GPCR或GPCR信号转导途径的激动剂、拮抗剂都可以筛选。

微流体数字化技术通过对裸结构的微喷嘴实施脉冲的惯性力，使微量流体在惯性力与黏性力交替作用下实现微流体的脉冲流动，从而实现数字化可控的微量流体的喷射，适用于液体微喷射、粉体微喷射等领域。 成熟度：基于非晶态玻璃材料毛细加工原理，进行了拉制、锻制、残余应力热处理等工序研究，制作了出微纳米级的微喷嘴、微管道。以玻璃微喷嘴制备仪为平台研究了不同拉制参数、锻制参数对微喷嘴几何形状的影响规律。基于微流体脉冲驱动-控制技术，分别采用拉制、锻制的微喷嘴稳定地制备了均一的微液滴。 微流体

ZM-IIIC智能型中医脉象仪   ZM-ⅢC智能型中医脉象仪又称为脉象采集仪及脉诊仪，用于无创伤性中医脉象检测，能实时显示和存储数字化脉波信号，自动判读脉象的位、数、形、势，识别脉图特征参数，并以多维逻辑判断模式确定脉名；能以脉诊检测为线索，经人机对话询问病人症状，作出初步的八纲和脏腑辩证结论，能显示和打印系列脉图、最佳脉图及其特征参数、取脉压力、脉幅趋势图、40秒脉波趋势图等组成的脉图检测报告，以及脉象提示的动脉系统张力、阻力、生理年龄、自律神经平衡状态和辩证结论等组成的临床辅助诊断报告。   一、仪器用途： 本仪器作为中医临床检测和基础实验教学的智能化仪器，可广泛用于中医诊断学实验教学以及中医各科的临床辅助诊断、病情监护，中药、针灸、康复、保健措施的疗效评价，为教学、科研、临床提供客观指标，本仪器在计算机网络远程教学和远程诊断方面也有良好的应用前景。   二、仪器组成： ■ 硬件：由MH-IIA型单探头脉象换能器、脉象采集器（含A/D转换器）、USB数据线以及用户自备电脑（留有空置的串行通讯口）和LQ模式点阵打印机等组成。 ■ 软件：ZM-IIIC智能型中医脉象仪操作系统（由仪器附带的光盘安装），工作于WINDOWS工作平台，有简体中文和英文版两种软件系统。   三、技术指标： （一）MH-IIA型单探头脉象换能器： ■ 灵敏度：0.5mv/克力（桥压6V） ■ 线性范围：0-250克力 ■ 温度漂移：小于2%（F.S）（-5℃－+40℃） ■ 机械滞后：小于1%（F.S） ■ 输出阻抗：1kΩ ■ 固有谐振频率：大于1000HZ（-3db） ■ 最大垂直位移距离：大于15mm   （二）脉象采集器： A：交流放大回路（脉搏波回路）： ■ 输入动态范围：0-25mv（相当0-50克力，动态力） ■ 满幅输出：4.5V ■ 时间常数：大于3秒 ■ 上限截止频率：大于1000HZ（-3db） B：直流放大回路（取脉压力回路）： ■ 输入动态范围：0-125mv（相当0-250克力，静态力） ■ 电源：交流220V/50HZ或110V/60HZ（根据用户要求定） ■ 功耗：小于10VA ■ 尺寸：145×115×25mm ■ 重量：0.5kg； ■ 连续工作时间：4小时，停机1小时后再开机。 C：A/D转换器：4路12位A/D转换。   四、各功能栏介绍： 1、系统栏：管理系统通讯口的参数设定，本系统对有关参数的设定为： 通讯口：COM1/COM2/COM3，速率为9600，回显：关。 握手协议：数据位8，校验位NONE，停止位2，流控制NONE。 通讯口请查看电脑中的“设备管理器”中的端口编号设定，其余参数用户不得更改。系统运行时，如发生通讯出错的情况，请用户核对上述参数，并作重新调整，系统通讯可恢复正常，如仍不能采样，则关闭电脑和脉象采集器后重新启动。 2、信息输入栏：点击该栏，屏幕弹出病人信息输入窗口，内容有病例号、姓名、性别、年龄、身高、体重、血压（PS、PD）、电话、地址等项目。用户可按键盘上的“Tab”键，选择信息输入项目，逐一输入。当各项输入完毕，再按“Tab”键，则指示“确认”输入信息，用户确认输入信息无误后，可按键盘上的“回车”键，或移动光标点击“确认”键，均可完成输入信息的储存，用户在输入性别项时，可用键盘上的“左、右”移动点标记确定性别，或用鼠标移动光标点击确定。输入血压时，可直接输入kpa数值；如输入mmHg数值，系统亦可换算成kpa数值。 3、脉图采样处理栏：点击该栏，系统即进入脉图采样处理界面，该界面上半部分为脉波实时采样显示和处理区；下半部分左侧为系列脉图采样过程中上一段采样的脉图序号、取脉压力、波形的显示区；下半部分右侧为系列脉图采样过程中取脉压力，脉幅趋势的显示区。在脉波实时采样显示和处理区中：左上角为脉图采样序号（NO：）以及实时取脉压力（P（g））的显示区；右上角为时间显示区；上部中间区为系统操作提示区，如提示调整取脉压力等信息；中部为实时采样的脉波显示区，横坐标为时间（t（s）），纵坐标为脉波动态搏动力（F（g））；下部为采样处理的功能键区，各功能键意义为： “采样”键：点击该键即开始脉波数据采样。系列脉图六段采样时，每段采样时间为10秒，采样序号显示从1至6，40秒脉图采样时，采样时间为40秒，采样序号显示40秒 “重放”键：点击该键即重新显示本次采样的脉波信号，可观察信号的质量。 “返回”键：在一次采样后点击此键表示放弃本次采样的数据，返回本次采样序号重新采样。 “储存”键：点击该键表示确认本次采样，将数据存入系统。 “扫描”键：点击该键即可在两种屏幕扫描速度25mm/s和50mm/s之间切换，横坐标每一大格表示1秒和0.5秒。 “增益”键：可调节信号幅值的放大或衰减，点击该键即可在信号灵敏度×1、×2、×1/2三档之间切换。位于×1档时，即幅值显示灵敏度为1g/mm，屏幕上纵坐标每一大格为10mm，相当10g搏动力。而×2档（即0.5g/mm）、×1/2档（即2g/mm）时，纵坐标每一大格分别表示5g、20g搏动力。 “分析”键：在按操作提示测完系列脉图和40秒脉搏趋势图后，如确认无误应作进一步脉象分析，点击该键则屏幕退到系统界面，并弹出辨脉过程的窗口，包括所测的系列脉图的始终脉图、最佳脉图及参数，P-H1和40秒趋势图，以及测脉结论。 “结束”键：在系列脉图或40秒脉采样过程中，如对本次采样的总体信号质量不满意，则点击该键可结束当前工作，放弃全部数据资料，并返回系统界面。但保留本次采样前输入的病人信息资料，以便重新进入脉图采样过程。 在脉图实时采样过程中，功能键的状态有两种情况：功能键字符为实体字，表示该键处于可操作状态；功能键字符为虚体字，则表示该键功能处于封闭状态。 4、40S脉图采样处理栏：点击该栏，系统即进入40秒脉图采样界面。该界面上部为脉图实时采样显示和处理区，下部为40秒趋势图显示区。操作、处理均同脉图采样处理。完成单独测试40秒脉图，如确认采样无误并储存信号后，点击“分析”键，则显示40秒趋势图，以及取脉压力、平均脉率、有无异常节律、自律神经平衡状态等分析结论。而点击“结束”键，则放弃采样数据，保留病人信息，返回系统界面。 5、辩证栏：脉图采样处理按操作提示完成后，应进入病人的辩证过程，点击该栏则弹出由脉诊作线索的问诊窗口，包括主症、兼症、舌象、追问等内容。问诊后，系统进行辩证，并提供包括动脉系统张力、阻力、生理年龄、自律神经平衡状态，以及辩证结论在内的临床辅助诊断报告。 6、打印/显示栏：点击该栏，系统弹出辨脉、辩证结果的窗口，依次显示本次测脉和辩证的有关资料和结论，显示完毕后可点击窗口上的“打印”键，可打印出一份辨脉辩证的综合报告。 7、数据保存栏：点击该栏，系统弹出数据保存的“输入信息窗口”，用户可自定义一个文件名，保存一次辨脉、辩证的数据文件，数据文件名称最多可由8个字符加3个扩展名组成，用户应根据数据文件管理的需要，规范命名，防止重码。 8、读取数据栏：点击该栏，系统弹出重新读入辨脉辩证数据文件的“输入信息窗口”，用户根据需要输入文件名，确认后即可转由打印/显示栏得到所需数据文件的全部辨脉、辩证资料，屏幕显示结束后可打印资料。 9、退出系统栏：点击该栏，即退出操作系统，返回WINDOWS系统界面。 10、“关于”栏：点击该栏，系统弹出的窗口显示本操作系统软件的版本。   五、系列脉图（含40秒脉图趋势）检测： 开机进入辨脉、辩证系统界面后，依下列顺序操作： 1、输入病人信息：打开“信息输入”栏操作，如未输入信息，操作者想直接进入脉图采样，系统会提示要先输入相关信息。 2、进入系列脉图检测：“打开脉图采样处理”栏操作，按屏幕上方中部操作提示区的提示要求，先固定好脉象换能器，换能器的探头，一般固定于腕部掌侧桡骨小头内侧N桡动脉搏动点部位，即“关”部。亦可按医嘱固定于“寸”或“尺”部检测，然后调节换能器的取脉压力调节螺旋钮，观察显示屏左上角的取脉压力数据（p（g）），调节到提示的压力值，系列脉图采样时，屏幕上提示的规范化压力梯度为50g/100g/125g/150g/175g/225g等六个档次，计采样六段信号。每次按提示的压力要求加压完毕后，待屏幕显示的脉波信号稳定后，应立即采样，防止出现因不及时采样而取脉压力变小的软组织应力松驰现象。另外，第二、第四两档压力，应控制在≤100g，≥175g近的数值，其他压力则控制在规定数据上下附近。 3、每次采样完毕操作提示部显示“重放/返回/存储？”的提问，如对所采集的脉波数据疑有随机信号干扰，则可点击“重放”键，重新显示本段采样的信号，显示完毕，提示部出现“返回/储存？”的提问，如信号质量不佳，点击“返回”键，则放弃本段采样的数据，保持本段采样序号，操作提示部提示保持原段的采样压力重新采样。如信号质量满意，则可点击“储存”键，将所采的数据存入系统。点击“储存”键后，采样序号刷新一次，并提示按下一段采样的压力数值进一步操作；屏幕下部左侧会显示刚采完的一段脉波，供下一步采样操作做波形对比参考；屏幕下部右侧的P-H1趋势图上，则会显示刚采完一段波形取脉压力与平均幅值的坐标点，并以连线与前一段的坐标点相连，显示P-H1变化趋势。 参数调整界面   4、六段系列脉图采样完毕后，脉图采样界面上弹出“选择最佳脉图”的窗口，系统以红色曲线标记其选择的最佳脉图。如果操作者判断系统识别有误，则可点击各段序号前的圆圈，人工干预作最佳脉图选择。选定后或系统识别正确，均应点击“进入参数调整”键，进入下一步骤。 5、屏幕弹出“参数调整”窗口后，界面上显示由系统识别的最佳脉图幅度、时间参数的位置。如系统识别有误，操作者可点击h1-h5幅值参数后的圆圈调整该参数。点击圆圈后，该参数的标记线段变成红色，可移动“左、右”两个方向键，把标记线移到正确的位置，参数调整过程中，屏幕上相应的参数值会改变，当应调整的参数操作完毕后，点击“调整结束”键进入下一步骤。 6、屏幕返回到脉图采样界面，采样序号提示为“40S”，操作提示要求调整到最佳取脉压力测脉。操作者可经“采样”、“储存”两个步骤，完成40秒脉图检测，之后点击“分析”键，则屏幕返回系统界面，弹出的窗口逐一显示辨脉的过程和结论。如操作者放弃本次全部采样，则点击“结束”键。   7、辩证： 完成系列脉图（含40S脉图）检测，并显示辨脉分析结论后，应进入系统的辩证程序。点击辩证栏，界面弹出辩证分析的窗口，操作者应按屏幕显示的问诊信息，在主症、兼症、舌象、追问各界面，点击病人具体的症状，完成人机对话，该栏最后可显示临床结论，确认后，返回系统界面。 8、打印/显示辨脉、辩证报告： 点击“打印”栏后，屏幕弹出辨脉、辩证报告的窗口，逐次确认显示完毕后，点击“打印”键，则可打印辨脉、辩证报告。 A：测脉结论报告： 脉位：分浮、中、沉三类。 脉力：分有力、中、无力三类。 脉势：分满实、正常、低乎虚、中空虚四类。 脉率：分迟、缓、平、带数、数、疾六类。 节律：分正常、不齐、结代、促四类。 脉形：以a，b，c分别标记主波、重搏前波、重搏波，按各波出现的情况分为abc，ab，ac，a等四种脉形。 脉名：按位、数、形、势综合判别，有平、弦I、弦II、弦III、弦IV、滑、平滑、平弦、弦滑、涩、芤、濡、虚、实、弱、微、散、革、牢、紧、洪、细、浮、沉、迟、缓、数、疾、结代、促等。 B：临床辅助诊断报告： 张力：反映动脉管壁紧张程度，结论分张力高、张力正常、张力低三类。 阻力：反映动脉系统外周阻力，结论分阻力高、阻力正常、阻力低三类。 生理年龄：系统按脉图特征参数与生理年龄相关性推出的结论，可提示动脉系统的生理状态。 自律神经平衡状态：反映交感神经与副交感神经平衡状态的指标，结论包括低水平平衡、正常水平平衡、高水平平衡、大体平衡、交感神经功能亢进、副交感神经功能亢进等类型。 辩证结论：根据脉象分析和问诊的综合分析，从八纲、脏腑、气血津液等方面提供临床辩证的结论。 9、数据保存： 在打印辨脉、辩证报告完毕后，按相关操作方法，建立数据文件，或者在不需要现场打印报告的时候，先打开数据保存栏，建立文件保存数据。