本项目面对行业世界性技术难题，解决大肠杆菌包涵体产物妨碍重组蛋白质药物生产的问题；建立我国自主知识产权的基因工程表达载体和体系。本项目通过深入了解蛋白质折叠过程、建立了微生物可溶性表达及后加工技术体系，通过多环节调控蛋白质折叠的策略，有效解决大肠杆菌包涵体难题，高效率低成本生产重组蛋白质药物。在生产环节发明了多种基因工程高效表达和不同层次助溶新技术及其整合；在制备环节发明了基因工程表达产物分离纯化及后加工新技术及其集成。本项目获8件发明专利授权、含1件美国专利，专利全部获得实施许可。本项目技术在美

成果描述：通过对猪场PEDV分子流行病学调查发现，目前PEDV流行毒株与目前使用的PEDV疫苗基因型差别较大，使用现有疫苗对猪群免疫后猪群不能抵抗流行毒株攻击。本创新团队分离并纯化获得了一株属于目前流行基因型毒株的PEDV，通过在VERO细胞中连续传代及培养条件优化，分离株适应在VERO传代细胞中稳定生长。拟与动物疫苗制品公司合作，研究开发预防目前PEDV流行毒株的PEDV灭活疫苗。市场前景分析：疫苗投入生产和使用后，预计在全国市场占有率达到20%以上与同类成果相比的优势分析：已进行申报临床试验，效果好

同种器官移植已成为治疗各种终末期疾病的最佳方法。移植免疫学研究已表明，移 植术后早期急性排斥反应的发生次数与严重程度是慢性移植物功能减退的潜在的重要 危险因素。但是，急性排斥发生与发展的机制至今尚未完全阐明，诊断上仍缺乏其他能 够敏感、准确、可靠、便捷地检测和早期干预移植排斥的指标。 本课题通过 20 例猪胰腺移植排斥模型的对照研究，观察急性排斥反应过程中外周血 淋巴细胞 CD15s、CD44、CD28 以及目前临床常用的监测排斥指标 CD4/CD8、MHC-DR 表达 程度的动态变化及与排斥关系。研究内容包括建立猪胰腺移植排斥模型；应用流式细胞 技术观测模型动物外周血 T 淋巴细胞 CD15s,CD44、CD28 及 CD4/CD8、MHC-DR 表达变化； 对移植排斥模型术后不同时期（排斥反应过程）移植物作病理检查，评定急性排斥等级， 分析与 CD15s、CD44、CD28 及 CD4/CD8、MHC-DR 表达程度的关系。 本课题得出结论：监测外周血淋巴细胞表面 CD15s、CD44、CD28 能在受体免疫状况 监测及排斥诊断上有一定的应用价值，优于传统的、单一 CD4/CD8 比值的检测；并且在 预测急性排斥的严重程度、转归上有一定的意义；同时监测淋巴细胞各亚群膜表面粘附 分子的阳性率和荧光强度有利于提供更多的淋巴细胞状态变化的信息。 经专家讨论认为该项目总体研究水平达国内领先水平。

本实用新型提供了一种可供猪使用的自动储水饮水槽，属于家畜养殖装置领域。其技术方案为：它包括槽体和自动储水机构，槽体中设置有隔板，隔板上设置有等水位孔，隔板一侧的槽体内设置有限位止水机构，限位止水机构上方设置有盖板；自动储水机构包括限位止水机构和按压延时机构，水管进水口处设置有按压延时阀，按压延时阀开关固定在连接杆一端，连接杆另一端固定在撞击板后端面上，撞击板后端面边角处设置有压缩弹簧。本实用新型的有益效果为：本实用新型中的可供猪使用的自动储水饮水槽结构简单，可减少猪只打斗且可自动储水止水。

其他成果/n一种猪腹膜间皮细胞的培养方法，涉及细胞培养技术领域。所述猪腹膜间皮细胞的培养方法包括以下步骤：将清理后的腹膜平铺于培养皿中进行酶解消化，得原代细胞悬液；将所述原代细胞悬液离心，保留沉淀物，并将所述沉淀物用原代培养液重悬，筛选得原代细胞；其中，所述原代培养液包含15％～20％(v/v)胎牛血清、79％～85％(v/v)DMEM/F‑12基础培养基、0.8％～1.1％(v/v)青链霉素混合液、0.03～0.05％(v/v)EGF以及0.05％～0.12％(v/v)ITS。本发明旨在提供一种适

ZL201110056015.6专利涉及作为猪标记辅助选择应用的与猪白细胞计数相关的分子标记及应用。所述的分子标记为蓝耳病毒受体唾液酸黏附素基因的片段，该专利中发现了一个SNP位点(367G-367A)，建立了一种针对该SNP位点的PCR-Hin6I-RFLP检测方法。该SNP位点可作为猪白细胞计数的分子标记进行标记辅助选择改良猪的抗病力。 ZL201010223062.0专利涉及作为猪标记辅助选择应用的与免疫性状相关的分子标记及应用。所述的分子标记由蓝耳病毒受体硫酸乙酰肝素个的内切酶基因HPSE克隆得到，在该基因猪发现了一个SNP位点（782A-782G），建立了一种针对该SNP位点的PCR-AluⅠ-RFLP检测方法。该SNP位点可作为猪免疫性状的分子标记进行标记辅助选择改良猪的抗病力。 ZL201010278643.4专利涉及作为猪标记辅助选择应用的与板油率，内脂率，腿臀肉骨率和眼肌面积等性状相关的分子标记及应用。 成果可在猪胴体性状与抗病力改良标记辅助育种中进行应用，三个专利组合使用可以降低板油率、内脂率、提高腿臀肉骨率、瘦肉率和抗病力，对于猪的分子育种具有显著的社会效益和经济效益。 转化条件：分子生物学常规设备和条件。 成果完成时间：2016年2月

该项目属于猪分子标记制备与应用技术领域，具体涉及一种与猪产仔数性状相关的分子标记及其应用，所述的分子标记从猪PTGS2基因内含子基因片段筛选得到。 该项目还公开了该分子标记的制备技术及其在与猪产仔数性状关联分析中的应用。 该项目为猪产仔数性状标记辅助检测提供了新的标记资源。 转化条件： 转化所需配套条件（资金、场地、设备等） 需要全自动DNA提取设备及联系大型种猪场实施。 成果完成时间：2016年

环境DNA技术是21世纪生态环境领域革新性技术之一,该技术打破了传统生物监测的局限，对生态系统各生态类群物种组成和丰度的准确解析，为生态系统生物多样性评估和生态健康诊断提供了新的方向，也为相关部门落实推进生态文明建设奠定了技术基础。 本项目开发了一系列基于环境DNA的水生态健康监测相关产品及整套污染诊断解决方案。该技术旨在针对饮用水源、受纳水体、景观水体、污水处理厂等，通过新型生物多样性评估技术快速准确计算出生态受损范围和程度，结合环境污染物诊断关键致毒物质，制定针对性环境修复方案。整套解决方案的创新点:1.开发了一种全新的环境DNA生物检测技术工艺包，用于物种多样性调查、入侵物种检测、濒危物种检测等生态环保领域，该技术完全摆脱了当下基于生物形态区分物种的枷锁，利用物种基因序列差异对生态系统内小到微生物，大到鱼类、哺乳动物等进行快速“无创式”健康体检，实现检测过程数字化和物种识别智能化，全面了解生态系统的自然生物资源。该技术和传统方法相比，物种多样性检测效率提高300%，检测成本下降60%，检测准确性提高30%;2.发明了一套新型的生物毒性评估方法和诊断设备，可实时监测并记录水生生物在水体中的生理反应和行为。通过受试生物的行为表现判断水体是否有毒以及致毒物质的种类，真实监测和评估化学污染物进入水体后对水生生物的急慢性影响，最后在实验室中可以对现场富集在吸附柱里的样品进行洗脱准确分析出为何种致毒物质，从而进行更高层次的风险评价及事故责任鉴定。 南京大学生态毒理与健康风险团队在2012年就开始进行DNA宏条形码相关研究，开发了一系列分子生物监测的方法，监测领域涵盖微生物、浮游植物、浮游动物、底栖动物和鱼类等群落，具备深厚的技术积累。目前团队申请国家发明专利19项，授权美国专利1项，软件著作权5项，覆盖涵盖技术方法、物种数据库和 eDNA大数据分析算法3大核心方面。同时，本团队多次承办或联合承办国内环境监测系统的大型培训，包括2019年全国监测系统培训、2020年全国环境监测系统站长培训班、2020年南水北调中线局河南分局培训等多次培训。团队2019年开始带头举办国家年度eDNA会议,目前已成功举办2届会议,邀请领域专家与行业相关人士与会讨论eDNA技术更新与应用推广，获得业内一致好评。项目团队也多次受到主流媒体报道，包括央视新闻联播、南京日报、江苏科技报、紫金山新闻等。团队已在2020年开展了“中国环境科学学会团体标准”的立项工作，将环境DNA技术标准化、流程化，为产品市场化提供重要保障。

该项目突破了猪流行性腹泻病毒培养条件苛刻的技术瓶颈，以目前流行的PEDV变异毒株和TGEV为基础，研制了猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎二联灭活疫苗。 市场预期： 作为目前国内被正式批准上市的首个PEDV流行毒株的疫苗，该疫苗具有低成本高效益的预防疗法, 同时具有很好的社会经济效益。 转化条件： 资金、场地、设备等条件均以具备，目前该疫苗已经转化。 成果完成时间：2016年

本发明公开了一种带加药器的猪用饮水装置，其特征在于，包括水箱，所述水箱通过进水管与所述加药器相连，所述加药器设置在所述进水管上方并固定在墙面上，所述加药器连接有分水管和混液管，所述分水管、所述混液管分别与所述进水管连接，所述分水管上设有电动阀a，所述混液管上设有电动阀b，在所述分水管与所述进水管交点、所述混液管与所述进水管交点之间的所述进水管上设有电动阀c。本发明的有益效果是：本装置，可以方便的对