成果描述：酶脱毛是一种公认的制革脱毛清洁工艺，在中国的猪皮制革中获得了成功的应用，但一直没有成功用于牛皮制造。已经报道的牛皮的酶脱毛工艺通常是在35℃至42℃的较高温度下进行，由于组织及纤维结构的差异，较高温度下牛皮胶原纤维容易受到破坏，容易发生松面、毛孔扩大等质量缺陷，甚至导致烂面等严重质量事故，并且在该温度条件下实施牛皮酶脱毛，工艺操作和控制难度极大。本技术提供了一种针对牛皮的低温酶脱毛工艺，并且完全不使用硫化物。该工艺技术使用与之配套的脱毛酶制剂，能够在较低温度下对牛皮进行脱毛处理，解决了长久以来本领域技术人员一直渴望解决但始终未获得成功的牛皮酶脱毛制革的技术难题，并且产生的含蛋白废水可以替代部分氮肥直接用于农业或城市绿化的灌溉，低温脱毛同时也节约了能源的消耗，降低了生产成本，提高了综合效益。市场前景分析：牛皮制革厂。与同类成果相比的优势分析：国际先进。

可以量产/n针对当前工业发展对脂肪酶的大量需求与脂肪酶实际表达水平较低 的技术瓶颈，突破了脂肪酶超高效表达技术关键，建立了真菌脂肪酶高 效表达技术平台，构建的米根霉脂肪酶基因工程菌 10L 发酵酶活力可达 40,000U/ml 以上，为当前报道的最高水平，具有极强的国际竞争力。产 品可用于油脂水解、转酯，食品加工、烘焙，生物柴油制备，饲料添加 剂，再生纸脱墨等广泛用途。建设其发酵生产线预计需要 800-1000 万元，经济效益可观。米根霉脂肪酶可用于油脂水解、转酯，食品加工、烘焙，生物柴油

油脂精炼过程中，脱胶是非常重要的一步工序，脱胶效果的好坏直接影响到油脂精炼的效率和最终产品的质量。传统的脱胶方法常存在产品质量不稳定、消耗大、得率低、“三废”排放量大等问题。酶法脱胶工艺是现代工业生物催化技术在传统油脂行业中的应用，是对现有化学或物理脱胶工艺的改进，以提高其经济性和环保性，有着广泛的发展前景和重要的经济和社会价值。本技术以自行筛选所得菌株BIT-18表达的磷脂酶为对象，开发了该磷脂酶在大豆油、菜籽油等常见油脂酶法脱胶中的应用，已完成了实验室工艺优化，建立了适于工厂规模油脂酶法脱胶工艺

糖化酶是糖化工业的重要酶制剂，但生产上的主要问题是：酶活力低、没有常温条件下的酶产品（使得糖化工艺中需要消耗大量能源）。利用定向进化技术获取较低温度下活力提高数倍~数十倍的新的酶分子、并确定新基因序列，转化受体菌。 我们的技术优势：基因分离技术是我们的优势，已报道全长基因序列15条，在天津基金资助下最近已克隆了糖化酶基因。定向进化是我们目前的主要研究方向之一，在留学回国科研启动基金资助下对谷胱苷肽-S-转移酶脱氯活性进行提高，已有研究进展。

全自动酶标仪318C+广泛用于各大高校科研机构、技术质量监督局、动植物检疫及食品饲料行业等，除开展血液学、免疫学、肿瘤免疫学、传染病免疫学、TORCH感染免疫学、基因检验项目外、还可以对食品安全三聚氰胺、黄曲霉素、农药残留、兽药残留等所有采用酶联免疫吸附试验（Elisa）进行项目检验，并且有相应版本的软件支持。   产品特点： 1、内置嵌入式系统，无需外接电脑即可操作、存储、打印; 2、测量模式：单波长检测，双波长检测，两点法，动力学法，酶抑制率，终点法、速率法。 3、*可选择吸光度、Cut-Off定性计算、单点定标、折线回归、线性回归、指数回归、对数回归、双对数回归、log-logit、幂回归、四参数回归、酶抑制率等计算方法；  4、在同一板上可进行多至12个不同项目的测试，并可同一板检测定性和定量项目。 5、*全面完善的质控功能，包含westguard多规则质控，即刻法质控等多种质控图及质控参数计算，具有质控报警功能。   技术参数： 1、*波长范围： 400-800nm 2、*滤光片配置：10个滤光片位置，标配405nm、450nm、492nm、630nm,选配6定制波长 3、吸光度范围：0.000―4.000A 4、*光通道数：8通道光路检测，另设一个独立参比通道（选配） 5、示值稳定性：≤±0.002A或≤0.5%T/10min。 6、示值误差（准确性）：≤±0.005A或±0.2%T。 7、重复性：≤0.2%或≤0.2%T。 8、灵敏度：≥0.01（L/mg）。 9、通道差异：≤0.01A。 10、波长示值误差：±1nm 11、半宽度：≤8nm 12、分辨率：0.001A（显示），0.0001A（内部计算） 13、*读板速度：单波长≤3秒/96孔，双波长≤6秒/96孔 14、振板功能：速度和时间可调 15、光源类型：进口卤钨灯 16、板条类型：标准96孔或其他型酶标板、条 17、适用孔型：平底、U型和V型 18、显示方式：7寸彩色液晶显示屏显示 19、输入方式：触摸屏输入，可选配鼠标和键盘 20、打印：内置热敏打印机，可外接打印机 21、数据储存：200,000个测试数据，500个以上测试项目（可扩展） 22、接    口： USB(A)口、USB(B)口、串口、并口 23、使用环境：温度5-40℃；湿度15%-80% 24、电源电压：220V±10%，50/60Hz 25、体积：475mm×350mm×210mm（长×宽×高） 27、重量：11.5Kg

低聚异麦芽糖作为一种健康糖源和功能性食品添加剂广泛应用于医药、食品和饲料添加剂行业中。在低聚异麦芽糖的制备过程中，α-葡萄糖苷酶的转糖苷作用是关键步骤。目前国内用于低聚异麦芽糖生产的α-葡萄糖苷酶大多为进口品。本项目获得的-葡萄糖苷酶生产菌株发酵液酶活达到 11 U/mL，为国内外现 有报道中的最高水平，发酵工艺简单易控。重组菌发酵液经过滤除菌并浓缩后可以直接作为酶液进行转化。酶转化生产低聚异麦芽糖转化率与进口酶相似，可以替代进口品。 

常见的纳米酶大多数是金属化合物纳米颗粒，其催化活性主要是来自在纳米颗粒表面的金属离子。在自然界中，生物酶的特征表明活性位点和支持、稳定活性位点的网络环境对于高催化效率同样重要。通过调整活性位点的成分和环境可以实现高的活性和选择性。水凝胶是一类具有良好生物相容性的三维亲水网络材料，其结构可以有效地保护酶分子活性中心，同时提供更好的底物迁移微环境，从而实现有效的催化作用，载酶水凝胶材料已成为生物学研究中的热点。纳米凝胶为水凝胶的纳米粒子，具有类似于宏观水凝胶材料的亲水网络及类似流体的传输特性，其纳米的尺寸可以作为进一步体内生物应用的理想载体。在受限的纳米空间中实现修饰或组装以获得杂化纳米凝胶仍然存在挑战。应对这一挑战，同济大学化学科学与工程学院王启刚团队从仿生的角度出发，设计了一种酶催化的原子转移自由基聚合（ATRPase）和金属配位交联方法成功制备出纳米人工多酶凝胶体系。该体系具有模拟超氧化物歧化酶（SOD-like）和过氧化物酶（POD-like）特性，可以实现肿瘤微环境级联催化的响应成像。日前，相关研究成果以“Multienzyme‐Mimic Nanogels Synthesized by Biocatalytic ATRP and Metal Coordination for Bioresponsive Fluorescence Imaging”为题，发表在国际著名学术期刊 Angewandte Chemie International Edition （《德国应用化学》） 上。同济大学化学科学与工程学院为该文的唯一通讯作者单位，硕士生齐美园为第一作者，王霞副教授和王启刚教授为共同通讯作者。 图1.（a）人工多酶凝胶体系的ATRPase及配位交联制备流程（b）模拟SOD和POD级联酶催化的肿瘤微环境响应的荧光成像机制。研究人员首先在纳米粒子表面修饰酶催化的原子转移自由基聚合的引发剂(-Br)，以具有良好生物相容性的生物酶为催化剂，修饰有双键的赖氨酸（N-acryloyl-L-lysine）为聚合单体，在纳米粒子周围聚合制备得到聚赖氨酸高分子刷，最后通过亚铁配位交联，从而构建出具有多酶活性的人工多酶凝胶体系（如图1所示）。凝胶体系中高分散的Fe离子一方面作为凝胶网络的交联剂，同时作为模拟酶的活性中心。通过模拟SOD和POD酶，先将肿瘤部位高水平的O 2 •− 催化转化为H 2 O 2 ，进一步基于肿瘤部位提升的H 2 O 2 通过级联酶催化反应实现肿瘤微环境响应的安全、高效的肿瘤成像。该人工多酶凝胶体系类似自然的过氧化物酶催化机制不产生羟基自由基，具有低毒性和高生物安全性。同时，ATRPase方法和金属配位交联技术可进一步实现多种纳米材料体系的制备，用于药物输送和其他生物医学应用。该研究成果得到了国家自然科学基金、国家重点研发计划等经费支持以及中国科学院强磁场科学中心的技术支持。王启刚教授团队多年来一直致力于高分子凝胶固定酶技术及其生物诊疗应用，近5年累计以通讯作者在 Adv.Mater. ,  Nat. Commun. ,  Angew. Chem. Inter. Ed. 等期刊发表SCI论文50多篇。文献链接：https://www.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/anie.202002331  PDF：anie_202002331.pdf课题组网站：https://qgwang.tongji.edu.cn/

纳米金由于具有独特的光学性质和表面生物分子偶联能力以及新发现的模拟酶功能，而在生物医学检测中有重要的应用价值。将特异性抗体偶联在金纳米颗粒上构建纳米探针，可以特异地标记肿瘤细胞，一方面可以利用其模拟酶特性进行显色和显微镜读片，用来有效替代传统的天然酶标记显色技术；另一方面，可以利用纳米金暗场成像的功能，通过暗场显微镜读片，从而省略了酶底物显色的步骤和成本，同时可以突破前一种技术只能定性判读的局限性，实现基于暗场光散射图像分析的定量检测，使得定量免疫组化检测成为可能。经过多年研发与攻关，我们已经成功实现针对恶性淋巴瘤的特异标记及双模式检测（模拟酶明场显色和暗场成像）技术建立，实现针对临床乳腺癌Her2检测的模拟酶增强暗场免疫组化定量判读，建立了定量判读图像分析软件，完成临床病例检测120例，检测灵敏性优于95%，特异性优于90%，对推动临床定量免疫组化技术及实现更精准的病理诊断具有重要意义。

本发明提供一类具有酪氨酸酶抑制活性的化合物，包括六种从桑叶中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的多酚类化合物。将药材经乙醇水溶液加热提取，浓缩，硅胶柱分离，洗脱，洗脱液浓缩干燥，再用制备液相色谱继续分离，收集溶液，溶液浓缩干燥后得到样品并进行结构鉴定。本发明还提供了从桑叶中分离上述多酚类化合物的方法。本发明提供的六种多酚类化合物具有较强的酪氨酸酶抑制活性，能够有效预防和治疗黑色素合成异常导致的人体色素沉着性疾病、黑色素瘤以及其它需要抑制酪氨酸酶活性的病症，可用于制备治疗此类疾病的药物。

纳米金由于具有独特的光学性质和表面生物分子偶联能力以及新发现的模拟酶功能，而在生物医学检测中有重要的应用价值。将特异性抗体偶联在金纳米颗粒上构建纳米探针，可以特异地标记肿瘤细胞，一方面可以利用其模拟酶特性进行显色和显微镜读片，用来有效替代传统的天然酶标记显色技术；另一方面，可以利用纳米金暗场成像的功能，通过暗场显微镜读片，从而省略了酶底物显色的步骤和成本，同时可以突破前一种技术只能定性判读的局限性，实现基于暗场光散射图像分析的定量检测，使得定量免疫组化检测成为可能。经过多年研发与攻关，我们已经成功实现针对恶性淋巴瘤的特异标记及双模式检测（模拟酶明场显色和暗场成像）技术建立，实现针对临床乳腺癌Her2检测的模拟酶增强暗场免疫组化定量判读，建立了定量判读图像分析软件，完成临床病例检测120例，检测灵敏性优于95%，特异性优于90%，对推动临床定量免疫组化技术及实现更精准的病理诊断具有重要意义。