针对病毒结构多样、快速变异的特征，周德敏课题组建立了病毒转化为活疫苗的通用方法：在保留病毒感染情况下，突变其一个三联码为终止密码，病毒就变为预防性疫苗，突变多个三联码病毒 就变为治疗性药物，颠覆病毒疫苗研发理念。

活载体疫苗是指对细菌、病毒、真菌等微生物进行基因改造，保留其基本入侵宿主细胞引起免疫反应的能力，降低其对宿主造成危害毒力，之后通过外源插入疫苗靶点基因等方法建立起来的一种新型疫苗。近年来团队在对常见肠道致病菌致病机理研究的基础上，筛选了单增李斯特菌做为载体菌，对其关键毒力基因进行敲除构建稳定减毒突变株用来表达外源基因。目前团队已构建了双基因敲除株疫苗载体、半致死载体等活载体疫苗运载系统，并对其进行抗原递呈、免疫机理等进行了初步研究发现，该类疫苗载体对免疫因子具有强烈的激活效应，更为重要的是该类活载体

01. 成果简介 中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）是2012年在中东地区首先发现的一种新型冠状病毒，与严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV）同属于β冠状病毒，能够引发严重的人类呼吸系统疾病。据世界卫生组织的最新统计表明，MERS-CoV已造成全球27个国家2428例感染，致死率高达35%。 MERS-CoV表面刺突蛋白（Spike）蛋白是病毒颗粒与细胞受体二肽基肽酶4（DPP4）作用的关键蛋白，也是MERS-CoV疫苗与保护性单克隆抗体研究的热门靶点。本项目团队在靶向刺突蛋白的高活性中和抗体筛选、鉴定、分子结构研究中取得了一系列突破。本团队在国际上首批报道了两株人源MERS-CoV中和抗体MERS-4与MERS-27，它们均能高效抑制假病毒与活病毒对体外培养细胞的侵染，在动物模型中也显示了很好的保护作用。该团队还综合运用结构生物学、生物化学以及病毒学研究方法阐明了这两株抗体识别Spike受体结合结构域（RBD）的不同位点，并阻断Spike与受体DPP4的结合。 本项目团队还利用一种稀有黑猩猩腺病毒AdC68为载体，搭载MERS-CoV表面全长的Spike蛋白，在转基因小鼠（hDPP4-KI）模型中，一次滴鼻免疫即可诱导产生长期保护性免疫反应，并完全预防小鼠感染或降低感染后的疾病进展速度。解决了目前研发的MERS-CoV疫苗大多需要进行多次免疫注射的复杂程序问题。进一步的抗体分析表明，免疫动物血清中含有广谱高滴度针对RBD的多克隆和单克隆中和抗体，能够有效阻断病毒与受体DPP4的结合，从而解析了其长期保护性免疫反应的分子基础和机制，为疫苗下一阶段进入大动物模型和人体临床试验做好了准备。                        MERS-CoV及其相关中和抗体和疫苗研究时间轴AdC68-S重组疫苗在hDPP4-KI转基因小鼠模型上的保护效果02. 应用前景 本项成果可应用于治疗或预防中东呼吸综合征冠状病毒的抗体药物及疫苗候选物。03. 知识产权 本项成果已申请4项发明专利，其中3项已授权。04. 团队介绍 本项目团队由生命学院实验室与医学院实验室联合组成，两位实验室负责人分别为清华大学生命学院和医学院教授、博士生导师，主要研究方向分别为结构生物学与病毒学，已发表国内外高水平学术论文数十篇，联合申请专利4项。05.合作方式 技术许可。06.联系方式 邮箱：zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

2020年2月25日，天津大学生命科学学院黄金海教授团队成功研发出新型冠状病毒口服疫苗，该疫苗以食品级安全酿酒酵母为载体，以新型冠状病毒S蛋白为靶点产生抗体。黄金海教授本人已经4倍量口服新冠疫苗样品，无任何副反应。目前科研团队正在寻求合作方，希望能推动疫苗早日走向临床，为疫情防控发挥作用。新型冠状病毒S蛋白（Spike protein，刺突蛋白）可与宿主细胞的病毒受体结合，是决定病毒入侵易感细胞的关键蛋白，也是开发预防或治疗用新型冠状病毒疫苗与药物的关键靶点。疫情爆发后，黄金海团队日夜奋战迅速设计制定了稳定表达COVID-19病毒S蛋白保护性抗原RBD-FP域疫苗菌株的研发方案。该疫苗，应用食品级安全酵母作为宿主研制生物防治制剂，通过口服途径免疫，具有激发局部黏膜免疫、调节机体免疫稳态，使用方便，安全性好、产能迅速等优势。目前，团队已完成了重组菌株构建、筛选，蛋白表达、发酵动力学等核心技术开发内容，并制备了少量胶囊、奶片、颗粒剂口服防治制剂样品。据黄教授介绍，该疫苗，除表达的病毒外源基因外，表达元件全部为酿酒酵母自身基因片段，不含外源抗性基因。新型冠状病毒疫苗制剂通过高表达新冠病毒保护性抗原，一方面可作为病毒感染的竞争性治疗制剂，也可通过激活黏膜免疫的疫苗机制，发挥预防性抗感染功能。其安全性、免疫方式、成本节约等优势突出，特别适用于应急性、无常规疫苗的烈性病防控。

已有样品/n在前期我们已经对H5亚型所有亚类代表毒株的血清型进行了分析，并重点对广谱性较好的毒株和广谱性差但中和活性高的毒株的免疫血清的抗原表位进行了详细的分析，构建嵌合的免疫原，诱导既有高的中和滴度，又有很好的广谱性免疫血清。可以更好的防控中国高致病性禽流感疫情，逐步的对高致病性禽流感的病毒在家禽内的感染进行清除。同时我们在这个基础上对这种免疫策略机制进行研究，阐明这种免疫策略广谱性的分子基础，找出中和活性大幅提高的免疫学机理，然后对这种新型的免疫策略进行优化，设计出季节性流感通用疫苗。每年中国家

研发阶段/n世卫组织把龋病与癌症，心血管病一起列为重点防治的三大非传染性疾病，成功开发了重组蛋白龋齿黏膜疫苗能够有效预防治疗龋齿，生产制备采用成熟的工程细菌技术，简单成本较低，产品可设计为冻干形式，保存运输不需冷链；接种通过鼻腔内黏膜直接无创伤滴注或直接喷雾，以自行接种，安全方便；已经完成实验室小样制备与动物实验，获得美国专利及中国专利。估算仅我国3-5岁儿童中每年用于龋病的最保守的费用就达20亿元，目前国内外尚无防龋疫苗上市，市场前景广阔。

成果描述：通过对我国规模化猪场猪丹毒的分子流行病学调查，结果表明猪丹毒新分离毒株发生了基因变异，现有猪丹毒疫苗不能够提供有效的免疫保护，从免疫后的猪丹毒发病猪场分离出一株猪丹毒新毒株，该毒株与传统疫苗毒株基因型差异大，可有效保护新型毒株的感染，可作为猪丹毒新疫苗的候选毒株。本团队拟与动物疫苗制品公司合作，研究开发猪丹毒灭活疫苗。市场前景分析：近年来，猪丹毒在我国呈现出爆发趋势。与同类成果相比的优势分析：创立了细菌耐药基因分子检测新方法； 改进了动物专用抗生素及其制剂的生产工艺和质量； 创制了非生素免疫增强剂；

猪流感(Swineinfluenza，SI)是目前危害养猪业的一种重要的 呼吸系统疾病，是规模化养猪场普遍存在且难以根除的群发性疾病之一。项目 开发了猪流感病毒的快速检测方法，制备了猪流感灭活疫苗（H1N1 亚型 SSD 株）。 经过临床试验证明，注射疫苗可显著提高仔猪成活率。 生产条件及经济效益预测：经过市场推广，疫苗销售良好，用户反应免疫 效果良好，可以显著提高仔猪抵抗力，仔猪成活率和出栏率提高 10%。平均每年 能为社会增加 1365 万元的经济效益；用于该项科研成果的每 1 元研制费用，在 经济效益计算年限内，平均每年可为社会增加 5.35 元的纯收益，经济效益非常 明显。

小试阶段/n该项目开发了一种丙型肝炎病毒的DNA疫苗及其制备方法，属于分子生物学和感染免疫领域。本发明的DNA疫苗是HCV-E2的第2个N-糖基化位点产生突变，即N423RT突变为D423RT。在E2基因两端引入CpG序列，并将突变的片段构建到真核表达载体上即得到能产生E2突变体的DNA疫苗。本发明方法简便，成本低，克服了糖基化蛋白质在表达上的困难，制备的DNA疫苗可诱导产生比野生型HCV-E2更强的特异性细胞免疫和中和性抗体，特异性的杀伤性CD8+T活性增强，并能够引起较强的IFN-γ、IL4释放