研发阶段/n一种猪蓝耳病基因重组猪霍乱沙门氏菌疫苗及应用。　　成果简介：沙门氏菌是一种胞内寄生的革兰氏阴性肠道杆菌，具有侵袭性。减毒沙门氏菌为载体的基因工程疫苗具有无法比拟的优越性，口服该种基因工程疫苗可以在激发产生抗沙门氏菌免疫应答的同时诱发特异性针对外源蛋白的体液和细胞免疫。猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种以妊娠母猪繁殖障碍以及仔猪呼吸道疾病的高度接触传染病，可对猪场造成巨大的损失。本发明涉及一种猪蓝耳病基因重组猪霍乱沙门氏菌疫苗及应用，属于动物细菌基因工程技术领域，具

01. 成果简介 中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）是2012年在中东地区首先发现的一种新型冠状病毒，与严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV）同属于β冠状病毒，能够引发严重的人类呼吸系统疾病。据世界卫生组织的最新统计表明，MERS-CoV已造成全球27个国家2428例感染，致死率高达35%。 MERS-CoV表面刺突蛋白（Spike）蛋白是病毒颗粒与细胞受体二肽基肽酶4（DPP4）作用的关键蛋白，也是MERS-CoV疫苗与保护性单克隆抗体研究的热门靶点。本项目团队在靶向刺突蛋白的高活性中和抗体筛选、鉴定、分子结构研究中取得了一系列突破。本团队在国际上首批报道了两株人源MERS-CoV中和抗体MERS-4与MERS-27，它们均能高效抑制假病毒与活病毒对体外培养细胞的侵染，在动物模型中也显示了很好的保护作用。该团队还综合运用结构生物学、生物化学以及病毒学研究方法阐明了这两株抗体识别Spike受体结合结构域（RBD）的不同位点，并阻断Spike与受体DPP4的结合。 本项目团队还利用一种稀有黑猩猩腺病毒AdC68为载体，搭载MERS-CoV表面全长的Spike蛋白，在转基因小鼠（hDPP4-KI）模型中，一次滴鼻免疫即可诱导产生长期保护性免疫反应，并完全预防小鼠感染或降低感染后的疾病进展速度。解决了目前研发的MERS-CoV疫苗大多需要进行多次免疫注射的复杂程序问题。进一步的抗体分析表明，免疫动物血清中含有广谱高滴度针对RBD的多克隆和单克隆中和抗体，能够有效阻断病毒与受体DPP4的结合，从而解析了其长期保护性免疫反应的分子基础和机制，为疫苗下一阶段进入大动物模型和人体临床试验做好了准备。                        MERS-CoV及其相关中和抗体和疫苗研究时间轴AdC68-S重组疫苗在hDPP4-KI转基因小鼠模型上的保护效果02. 应用前景 本项成果可应用于治疗或预防中东呼吸综合征冠状病毒的抗体药物及疫苗候选物。03. 知识产权 本项成果已申请4项发明专利，其中3项已授权。04. 团队介绍 本项目团队由生命学院实验室与医学院实验室联合组成，两位实验室负责人分别为清华大学生命学院和医学院教授、博士生导师，主要研究方向分别为结构生物学与病毒学，已发表国内外高水平学术论文数十篇，联合申请专利4项。05.合作方式 技术许可。06.联系方式 邮箱：zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

随着世界养猪业的发展，规模化饲养技术的应用和饲养高度密 集，以及突发腹泻因素存在，使得猪腹泻病日趋流行，危害日渐严重。猪传染 性胃肠炎与流行性腹泻在养猪场引起猪腹泻病的报道屡见不鲜，特别是规模化 猪场在受到蓝耳病、圆环病等感染之后免疫功能下降时，猪腹泻类病伺机暴发， 导致较严重的经济损失。本成果是利用自主分离鉴定猪传染性胃肠炎与流行性 腹泻病毒，通过基因工程的方法，在乳酸菌中进行表达，通过优化培养工艺， 提高乳酸菌的培养密度，混合研制的多价口服疫苗，用于该类疾病的免疫预防。 该产品的开发为该病的防控起到重要作用，具有重要的应用价值和经济效益。 

腹泻是导致仔猪死亡的头号疾病，每年给我国生猪生产带来巨大经济损失。目前，导致仔猪高发病率和高死亡率的主要致病原是变异株猪流行性腹泻病毒（vPEDV）和新现猪丁型冠状病毒（Porcine deltacoronavirus, PDCoV）。然而，目前国内外尚无防控vPEDV和PDCoV感染致病的疫苗。 本科技成果是我校动科院预防兽医学以唐玉新教授为首的科研团队聚焦于猪肠道腹泻病原研究，成功分离出稳定、高滴度的vPEDV和PDCoV为基础成功研制而成。PDCoV是导致仔猪腹泻的新现猪丁型冠状病毒，该团队在我国大陆本土首先发现并进行了系统研究，成果率先在国际SCI源刊物报道，该论文已成为ESI热点论文（2015）和高被引论文（2016），实现了江西农业大学高被引论文零的突破（引自：基于ESI的江西农业大学优势学科评估分析报告（第1期），图书馆信息简报，2017年6月）。vPEDV+PDCoV疫苗创制工作，获得“十三五”国家重点研发专项资助（2017YFD0500600），目前已经完成实验室阶段等工作，即将进入临床试验阶段；成果目前已经转让给国内一家疫苗上市公司，转让金额1500万元。本项目研究产品有望成为我国一类新兽药，上市后，将产生巨大的经济效益和社会效益，据估算，每年可减少仔猪死亡约1000万头，创造直接经济效益>100亿元，对提高生猪生产效益，降低动物病原对人类的威胁，保障人类健康和动物源食品安全，维持CPI稳定均可起到十分的重要作用。

国际顶级综合期刊美国科学院院刊（PNAS）在线发表动物医学院孔庆科博士课题组在多糖疫苗研究中的重要研究成果“Synthesis and delivery of Streptococcus pneumoniae capsular polysaccharides by recombinant attenuated Salmonella vaccines”（减毒沙门氏菌疫苗合成及递送来源于肺炎链球菌的多糖抗原）。该研究首次通过合成生物学，细菌遗传学及免疫学等方法，将革兰氏阳性细菌的表面多糖抗原成功表达合成于革兰氏阴性细菌减毒沙门氏菌的表面，并连接于沙门氏菌内毒素的类脂A上，利用遗传改造及调控的减毒沙门菌疫苗载体递送肺炎链球菌的多糖抗原开发新型疫苗。该方法突破了目前固有的阳性细菌多糖疫苗的构建方式，为将来快速、高效的构建多糖疫苗奠定了基础。 博士后苏华荔及青年教师刘青博士为共同第一作者，动物医学院孔庆科博士为通讯作者，西南大学为第一完成单位及第一通讯作者单位。美国科学院院士、佛罗里达大学Curtiss教授为共同通讯作者，动物医学院2017级硕士研究生卞晓萍及佛罗里达大学王世峰博士参与相关工作。该研究得到国家自然科学基金及美国NIH项目的资助。

已有样品/n猪流行性腹泻病毒重组猪霍乱沙门氏菌基因工程活疫苗及制备与应用。　　成果简介：本发明的重组菌株表达的是猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒的保护性抗原基因。其中S蛋白的A、D抗原位点和N蛋白的N321抗原位点是猪传染性胃肠炎病毒重要的免疫原性基因片段，COE基因和SD基因是猪流行性腹泻病毒重要的免疫原性基因片段，均具有良好的免疫保护性。可以同时提供针对猪霍乱沙门氏菌、传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒三种病原的保护力。　　应用前景：目前，PED商品化疫苗主要有灭活苗和弱毒苗两种，这两种疫苗

成果描述：目前已制定 《鸡新城疫（La Sota）、传染性支气管炎（SAIBK）二联灭活生产与检验用种毒的研究资料》、《鸡新城疫（La Sota）、传染性支气管炎（SAIBK）二联灭活疫苗制造与检验规程》、《鸡新城疫（La Sota）、传染性支气管炎（SAIBK）二联灭活疫苗质量标准》等相关技术标准，研制出鸡新城疫（La Sota）、传染性支气管炎（SAIBK）二联灭活疫苗，已进行申报临床试验。市场前景分析：疫苗投入生产和使用后，预计在全国市场占有率达到20%以上。与同类成果相比的优势分析：该疫苗针对目前鸡场流行肾型IBV毒株以及新城疫II型毒株，具有良好的免疫效果。疫苗投入生产和使用后，预计在全国市场占有率达到20%以上。

本产品含有鸡新城疫病毒 La Sota 株和传染性支气管炎病毒 QXL87 株，每羽份病毒鸡新城疫病毒含量不低于 106 EID50，鸡传染性支气管炎病毒含量不低于 103.5 EID50；产品对鸡新城疫免疫保护效率不低于 90%，对 QX 型传染性支气管炎病毒免疫保护效率不低于 80%。

本发明构建一种新型混合佐剂DDA/PolyI:C。该混合佐剂组 （AMM+DDA/PolyI:C）和单独佐剂组（AMM/DDA）分别加强免疫小鼠两 次后，脾脏淋巴细胞经抗原AMM刺激后，皆可产生分泌较仅有融合蛋 白AMM组高的IFN-γ; 肺部荷菌量试验表明佐剂实验组加强BCG免疫 后，肺部荷菌量都较PBS组低；肺组织病理分析显示混合佐剂组 AMM+DDA/PolyI:C强化BCG免疫后，肺组织病理损伤较BCG组和DDA为佐 剂加强组轻（P＜0.05＝。

鸡新城疫、禽流感、Ⅰ群禽腺病毒是影响养禽业发展的三种传 染性疫病，这三种传染性疫病在我国很多地区的养鸡场同时存在，给养禽业造 成了极大的经济损失。青岛农业大学研发团队一直致力于疫病的流行动态规律 及病毒变异情况跟踪调查。通过长期流行病学调查、病毒分离鉴定及对各地流青岛农业大学科技成果介绍 2017 －34－ 行毒株的保护效果等分析研究，最终筛选出与流行毒株同源性高、免疫原性好 且有自主知识产权的病毒毒株作为制苗用毒株。根据疫病流行情况开展了鸡新 城疫、禽流感（H9 亚型）、禽腺病毒（Ⅰ群，4 型）三联灭活疫苗的研究工作， 在完成了毒种、生产工艺、安全、效力、免疫期、保存期、中间试制等研究基 础上获得了详实的试验数据。该产品具有广阔的市场应用前景。