本发明公开了一种结核病基因药物及其制备方法，所述结核病基因药物以腺病毒为基因表达载体，表达细胞内颗粒溶素蛋白以及细胞外颗粒溶素蛋白，所述细胞内颗粒溶素蛋白以及细胞外颗粒溶素蛋白的表达量在 2:8 至 8:2 之间。所述方法包括：制备细胞内颗粒溶素白基因穿梭质粒以及细胞外颗粒溶素蛋白基因穿梭质粒；制备表达细胞内颗粒溶素蛋白的第一腺病毒和表达细胞外颗粒溶素蛋白的第二腺病毒；并按照数量比例 2:8 至 8:2 混合，即制得本发明提供的基因药物。本发明提供的基因药物通过联合细胞内和细胞外颗粒溶素重组腺病毒，

本试剂盒可用于牛结核病的流行病学调查、监测、控制、净化与根除。该试剂盒检测灵敏度高、特异性好，与国外进口 BOVIGAM®试剂盒的检测总符合率达到 95.33%，同时与进口试剂盒相比价格便宜，适于我国临床牛结核病检疫的大规模推广使用，具有十分广阔的应用前景和经济价值。

项目简介 本项目利用具有自主知识产权的乙偶姻（3-羟基-2-丁酮）高产菌株——枯草杆菌，通过有效的发酵控制策略，促进乙偶姻的生成；并利用固定化菌体作为生物催化剂，构建枯草杆菌转化葡萄糖生成乙偶姻的高效生产工艺，有效解除了产物抑制现象；并建立了一套高效的乙偶姻产品提取纯化工艺。该技术是国家科 技支撑项目的成果，乙偶姻生产水平达到目前国际领先水平，已申报两项国家专利。 创新要点 采用的乙偶姻高产菌株具有自主知识产权；建立了简单、高效、低成本的葡萄糖转化生产乙偶姻的生产工艺。 

（一）蜡样芽孢杆菌蜡样芽孢杆菌NJYH63305是团队自行筛选的有益芽孢杆菌，广泛应用于农业、医药、食品保健、饲料等领域。在农业领域，是一种集抑菌、杀虫、促生于一体的环境友好型高效生防制剂，对茶轮斑病菌、黄瓜枯萎病菌、立枯丝核菌、烟草赤星病菌、茶云纹叶枯病菌、小麦全蚀病菌、小麦纹枯病、尖镰孢菌、镰刀菌、终极腐霉菌等植物病害及小菜蛾具有较强抑制作用。在医药领域，可调节人体肠道微生态平衡，适于治疗急慢性痢疾、肠炎、腹泻、婴幼儿腹泻引起的肠功能紊乱等；在食品保健领域，可作为食品添加剂，长期服用能促进营养物质的消化吸收，减少肠道疾病的发生，提高免疫能力、增强抗病能力。 1、蜡样芽孢杆菌国内外研究进展目前，国内外蜡状芽孢杆菌研究大多处于实验室内研究阶段，其商品化并应用于农业防治的实例较少。国内市场上蜡样芽孢杆菌农用制剂大部分为复配试剂，同时其大规模培养过程中也存在不少问题，如发酵放大过程信息采集困难、制剂有效期不长、产品货架期短等，这些问题的深入研究对解决蜡样芽孢杆菌高密度培养瓶颈、降低蜡样芽孢杆菌生产成本、促进细胞大规模培养领域重大突破具有重要意义。2、本课题组技术优势（1）团队以项目为纽带，建立了蜡样芽孢杆菌在线监控的高密度培养与多阶段发酵集成技术，在1000L发酵罐上蜡样芽孢杆菌活菌数高达800亿个/g, 比初始培养提高了230%，达国际领先水平；（2）筛选的芽孢保护剂，可提高蜡样芽孢杆菌活性，延长半衰期40％以上；（3）协同江苏省农科院及南京农业技术推广站进行绿色防控技术推广，于江苏浦口林大蔬菜基地、江宁区湖熟街道设施蔬菜基地、溧水傅家边茶厂等地建立2800亩示范区，重点试验核心区460亩。推广示范区内，蜡样芽孢杆菌对水稻纹枯病、灰霉病、晚疫病等真菌病害抑制率达51.8％～85.9％，与苏云金芽孢杆菌（Bt）进行增效试验，小菜蛾杀灭率提高29%，降低化学农药使用量50％以上，农药残留量低于国家无公害农产品标准；（4）目前已在国内外重要期刊发表学术论文10余篇，出版专著《高效有益微生态制剂开发与利用——蜡样芽孢杆菌》，申请国家发明专利4项，授权3项，其中3项（ZL200910028025.1、ZL201010579133.0、ZL200910028320.7）在南京新百药业有限公司成功实现转化。（二）凝结芽孢杆菌团队自行筛选获得一株益生凝结芽胞杆菌NJYHHWG 877005，除具有和乳酸菌及双歧杆菌同样的保健功效外，还具有耐酸、耐热、耐盐、容易培养和保存的特点。凝结芽孢杆菌为兼性厌氧菌，进入肠道后会消耗游离氧，有利于厌氧微生物乳酸菌和双歧杆菌的生长，多用于调节肠道内微生态菌群平衡，团队自主知识产权的凝结芽胞杆菌NJYHHWG 877005对甜瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、西瓜炭疽病菌等有很强的防治效果，可进行新型高效生物农药的开发。

本发明涉及一株粪产碱杆菌WZ‑2，该降解菌从戊唑醇污染的菜地土壤中分离获得。该菌株已于2018年1月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC NO.15301。本发明提供的降解菌WZ‑2制成菌悬液后，可以通过直接加入土壤的方式应用于土壤中戊唑醇的降解，能快速的降解土壤中残留的戊唑醇，从而降低戊唑醇对土壤环境的生态压力，起到修复戊唑醇污染土壤，保护生态环境的作用。该菌株的菌剂制备工艺简单，效率高，成本低，无二次污染，具有良好的应用前景。

本项目建立了一套完整、高效的微生物发酵制备双乙酰的工艺方法。该方法利用具有自主知识产权的双乙酰高产枯草杆菌，通过基因工程与代谢工程手段，强化双乙酰合成途径，并通过有效的发酵控制策略，实现了双乙酰的高效稳定生产；并建立了一套高效的双乙酰产品提取纯化工艺。 创新要点 利用具有自主知识产权的双乙酰高产菌株，建立了一套完整、高效、稳定、适于规模化生产的微生物发酵制备双乙酰的工艺路线；所生产双乙酰产品具有天然等同度。 

本成果获得 2015 年青岛市科技进步奖二等奖。水貂巴氏杆菌病 蜂胶灭活苗，在传统的水貂巴氏杆菌灭活疫苗的基础上加入蜂胶，加入蜂胶后 的疫苗在使用上更加安全，在免疫效果上更加好，在同类灭活疫苗的研制上处 于领先水平，此项目在其他细菌疫苗研制上也提供了有价值的借鉴作用。本成青岛农业大学科技成果介绍 2017 －35－ 果主要应用于水貂的巴氏杆菌病的预防，投入生产使用后将高效安全的预防水 貂巴氏杆菌病的发生，为广大水貂养殖户提供高的经济保障，因为水貂巴氏杆 菌病蜂胶灭活苗在生产上操作相对简单便于大规模生产，对生产商来讲有着较 其他疫苗所没有的优势。 生产条件及市场预期：水貂巴氏杆菌病是水貂的常发病，主要影响水貂的 呼吸系统引起水貂的肺炎是其主要的特征，发病率高致死率也高对水貂的养殖 影响严重。水貂巴氏杆菌病蜂胶灭活苗，能够有效预防此病，因其操作简单因 而能够及时预防和治疗水貂巴氏杆菌病。有肺炎的病貂会严重影响貂皮的质量， 所以水貂巴氏杆菌病蜂胶灭活疫苗在预防巴氏杆菌病保障养殖户经济效益的同 时，也为社会提供了优质的貂皮，所以此疫苗有着广阔的经济和社会效益。 

谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)被广泛用于食品工业生产，是一种安全性很高的工业菌株；具有包括 Sec 和 Tat 分泌途径在内完善的蛋白分泌系统；没有类似于大肠杆菌(E. coli)所带来的内毒素和宿主细胞蛋白污染等问题。这些显著优点使它成为一种有吸引力的外源蛋白表达生产用的底盘细胞。目前国内生物医药领域主要依赖于 E.coli 表达体系生产医药蛋白，原创性外源蛋白表达体系的缺失，在知识产权方面将制约到我国生物医药产业的发展。该项成果有望为我国生物医药产业提供一个具有自主知识 产权的谷氨酸棒杆菌安全高效外源蛋白表达体系。

本发明提供一种黄杆菌突变株，其保藏编号为CGMCC No.14855。本发明所保护的菌株通过对已有的产岩藻聚糖硫酸酯酶的黄杆菌进行长期发酵筛选获得。在大规模发酵中，该菌株的发酵产岩藻聚糖硫酸酯酶能力明显提高，其产岩藻聚糖硫酸酯酶的能力最高达到310U/ml。

该成果是从土壤中分离出的一株对消除人、畜禽排泄物产生的恶臭气体具有独特作用的菌株。该菌种添加剂加于饲料中不仅具有其他饲用芽孢杆菌的功用和安全性好、稳定性好的特性，而且对减少动物排泄物恶臭作用显著。 适量添加巨大芽孢杆菌添加剂有效降低了蛋鸡排泄物中的脲酶、尿酸酶活性，减少了氨氮、尿酸、总氮及总硫的浓度，进而减少了氨气和硫化氢气体的释放量，改善畜舍环境，促进蛋鸡对营养物质的利用率；可以减少生长肥育猪粪氨气的释放量。