固定化重组头孢菌素脱乙酰酶生产
本项目利用重组大肠杆菌异源表达来自枯草芽孢杆菌中的CAH基因,发酵生产头孢菌素脱乙酰酶蛋白。由于重组蛋白表达量高,采用简单的硫酸铵分级沉淀方法即可达到很好的纯化效果,极大程度地缩减了蛋白纯化的成本。在工业应用中,将游离酶固定在载体上可以实现多次重复利用,产物分离容易,可以连续操作。在众多固定化酶方法中,由于制备的固定化酶稳定性好,共价结合的方法在工业中最为常用。本项目采用共价结合的固定化方法,在温和条件下将游离酶连接在亲水性环氧基载体上,得到的固定化酶活力回收高,稳定性好,重复使用次数高。已完成整条工艺流程。重组大肠杆菌发酵生产CAH蛋白进入中试阶段,通过优化培养条件,发酵培养基等工作,降低生产成本,提高产酶量。目前完成的蛋白纯化及固定化酶制备工艺,对产品的性能已通过相关的实验得到很好的评价结果。在不断完善发酵和固定化酶制备工艺后,即可以进一步扩大生产试验规模,从而应用于工业生产。
华东理工大学
2021-04-13