研发阶段/n本成果合成了人工免疫原和包被原，制备出高效价的特异性抗体，建立了肌肉(猪、鸡、鱼)、肝脏(猪、鸡)、肾脏(猪)中AOZ残留检测的ELISA方法，并与建立的多残留检测HPLC方法进行了对比。该方法的检测限、回收率、变异系数均达到我国兽药残留快速检测的要求。以上述方法为基础，在国内首次研制出动物样品中AOZ残留检测ELISA试剂盒。通过与国外同类试剂盒、HPLC法的比对和动物残留试验证明，该试剂盒的灵敏度、准确度和重现性与国外试剂盒水平相当。经多家检测机构和研究单位的复核和应用表明，该试剂盒

研发阶段/n本成果合成了人工免疫原和包被原，制备出高效价的特异性抗体，建立了肌肉(猪、鸡、鱼〉、肝脏(猪、鸡)、肾脏(猪)、鸡蛋和牛奶中金霉素残留检测的ELISA方法，并与建立的多残留检测HPLC方法进行了对比。该方法的检测限、回收率、变异系数均达到我国兽药残留快速检测的要求。以上述方法为基础，研制出动物样品中金霉素残留检测ELISA试剂盒。该试剂盒的灵敏度、准确度和重现性与国外试剂盒水平相当。经多单位应用表明，该试剂盒灵敏、准确、操作简便，对金霉素特异性强，适用于金霉素残留的快速筛选检测。技术水平

成果先后获省级科技进步一等奖、国家科技进步二等奖。试剂盒可用于禽白血病流行病学调查和种禽禽白血病的净化与根除，具有简便快速，特异性高，费用低，适于大规模检测等特点。

1. 痛点问题 水中内分泌干扰物、微囊藻毒素等微量有毒污染物对生态环境和人体健康带来潜在不利影响，已经演变成为全球性关注的重大环境问题。因此，发展微量有毒污染物的快速监测技术，对于应对微量有毒污染物环境与健康风险具有重要的支撑作用和现实意义。 仪器分析技术是水中微量有毒污染物标准检测技术，然而这类技术需要昂贵的仪器，冗长费力的样品准备过程和专业的操作人员，限制了此类技术在污染事故应急、现场快速监测等领域的应用。此外，对于总微囊藻毒素这类包含上百种结构变异体的混合物，依赖于化合物结构实现浓度分析的仪器分析技术无法穷尽，特别是捕捉到尚未鉴定出来的微囊藻毒素变异体。免疫分析技术利用抗体对抗原的特异性亲和作用，可实现对一种或一类微量污染物的快速高灵敏分析。基于免疫分析原理构建的酶联免疫检测试剂盒具有快速、高灵敏、操作简便、易于标准化等优点，其核心是抗体材料。特别是，为了筛查总微囊藻毒素结构变异体并预警蓝藻水华，美国环境保护署于2016年公布了最新的未管制污染物监测规则，其明确推荐发展基于酶联免疫检测试剂盒的总微囊藻毒素快速检测方法，其中，具有微囊藻毒素结构变异体广谱识别能力的抗体是发展该技术的核心材料支撑。 本项目攻克水中微量有毒污染物免疫检测中的关键瓶颈，有望解决现有技术痛点，为发展水中微量有毒污染物快速ELISA检测技术提供支撑。 2. 解决方案 针对水中蓝藻毒素，发明了一种广谱型微囊藻毒素单克隆抗体及其制备方法。该抗体能够特异性识别总微囊藻毒素与节球藻毒素Adda基团，检出限达到0.1 ng/ml，对12种微囊藻毒素结构变异体交叉反应率55~125%，线性范围跨越一个数量级，为研发总微囊藻毒素ELISA试剂盒提供了材料支撑。针对水中痕量内分泌干扰物，发明了固相识别雌激素受体的雌二醇衍生物筛选方法，可以筛选出与雌激素受体具有高特异性高亲和力的衍生物，进而可以缩短固相雌二醇与雌激素受体结合的时间，增加体外环境下的结合稳定性与亲和力；建立了一种利用间接竞争ELISA 高通量快速筛查多种内分泌干扰物的方法，可以实现水中多种内分泌干扰物的同步快速检测，典型标准曲线测试结果显示该方法对双酚A检出限为3.6 μg/L，定量检测区间为8.2-264.7 μg/L；对雌二醇检出限为3.2 μg/L，定量检测区间为4.2-12.0 μg/L；对壬基酚检出限为24.8 μg/L，定量检测区间为8.2-264.7 μg/L。 合作需求 1、寻求在水环境监测系统研发、生产和销售及运营服务的企业开展技术研发合作； 2、寻求在生态环境、水利、市政等政府部门或事业单位及受环保部门重点监管的污染源企业的环境监测相关应用场景对接资源。

本试剂盒可用于牛结核病的流行病学调查、监测、控制、净化与根除。该试剂盒检测灵敏度高、特异性好，与国外进口 BOVIGAM®试剂盒的检测总符合率达到 95.33%，同时与进口试剂盒相比价格便宜，适于我国临床牛结核病检疫的大规模推广使用，具有十分广阔的应用前景和经济价值。

可以量产/n该成果利用纯化的乙型脑炎病毒，建立了ELISA抗体检测试剂盒。该成果主要用于猪的乙型脑炎病毒抗体检测，可以评价猪乙脑疫苗的免疫效果和感染监测。

一、技术(成果)简介 本项目组自1999年开始与美国夏威夷大学合作已经开发出我国目前食品及环境中一些常见有毒残留物的ELISA方法，这些有毒物质包括对硫磷、甲基对硫磷、克百威、甲萘威、2，4-D、盐酸克伦特罗、己烯雌酚、氯霉素、功夫菊酯、五氯硝基苯、呋喃唑酮、多氯联苯等。ELISA方法的特异性好，对几种有毒物的检测灵敏度均达到ppb级，最低检测限小于1ppb，该方法与传统的仪器分析方法的相关性大于95%。检测样品只需进行简单的前处理，单个样检测用时短

本发明公开了基于纳米抗体检测甲萘威残留的ELISA试剂盒及其应用，所述试剂盒包括盒体、设在盒体内的酶标板以及试剂；其中，酶标板的每个孔包被有甲萘威包被抗原，所述试剂包括抗甲萘威纳米抗体、甲萘威标准溶液、酶标记的二抗、缓冲液PBS、洗涤液PBST、底物液、显色液和反应终止液等。检测过程中，酶标板孔壁上吸附的包被抗原和待测甲萘威相互竞争与抗体反应，通过显色反应观察结果。检测已知浓度的甲萘威并绘制标准曲线，可以推算出待测甲萘威的浓度。本发明的优点是能准确灵敏地检测水、蔬菜中甲萘威残留，样品的前处理过程简单，耗时少，能同时检测大量的样品，样品检测成本远低于传统的仪器检测方法。

已有样品/n猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测试剂盒及应用。　　成果简介：本发明用原核表达纯化的猪肺炎支原体主要免疫原性膜蛋白P46和P65作为包被抗原，建立ELISA方法，并进一步组装成试剂盒。具有特异性强，灵敏度高，检测时间短的特点，能够及时、快速、大规模的监测临床上的猪肺炎支原体抗体，确定猪群感染动态，采取时效性强的药物预防或免疫预防或管理措施。　　应用前景：本发明的试剂盒能直接对猪肺炎支原体进行检测，具有特异性强，灵敏度高，检测时间短的特点；操作简单易行，不需由专业人员操作；其稳定性好、保存

本发明公开了一步法检测甲萘威残留的ELISA试剂盒及其应用，所述试剂盒包括盒体、设在盒体内的酶标板以及试剂；其中，酶标板的每个孔包被有甲萘威包被抗原，所述试剂包括抗甲萘威VHH‑AP基因工程抗体、甲萘威标准溶液、缓冲液PBS、洗涤液PBST、显色液和反应终止液等。检测过程中，酶标板孔壁上吸附的包被抗原和待测甲萘威相互竞争与抗体反应，通过显色反应观察结果。本发明的优点是能一步准确灵敏地检测出水、土壤和蔬菜中甲萘威的残留，样品前处理过程简单，耗时少，能同时检测大量样品，样品检测成本远低于现有检测方法，与传统ELISA试剂盒相比，样品检测所需时间大大缩短。