本发明将裂解酶Bp7e氨基酸的第99位亮氨酸和102位蛋氨酸分别进行突变为丙氨酸和谷氨酸，经原核表达技术得到了突变体蛋白并经Western-blot对其进行了鉴定，命名为Bp7c突变体蛋白。对Bp7e和Bp7e突变体蛋白进行了纯化及浓度测定，通过体外裂解实验及裂解谱检测得知，纯化的Bp7e和Bp7e突变体两种蛋白具有广谱的抑菌作用，对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和多种血清型大肠杆菌均有裂解效果，且Bp7e突变体裂解效果整体优于天然裂解酶Bp7e。

鉴定首个高阶环加成酶，拓展了环加成酶的认知 一、项目分类 重大科学前沿创新 二、成果简介 南京大学化学化工学院梁勇教授，生命科学学院谭仁祥教授和戈惠明教授的科研团队，发现了抗幽门螺旋杆菌的潜在药物-汉城霉素并对其生物合成途径进行深入研究。通过多菌株基因组序列比对，对汉城霉素类生物合成基因簇进行了鉴定，利用微生物学，分子生物学、底物化学衍生化、体外酶促反应等手段从该基因簇中鉴定出一个新颖、可催化高阶环加成反应的酶。团队基于蛋白质晶体数据，量子化学计算和蛋白质定点突变技术，对该酶促动力学过程进行了深入解析，最终确定该酶通过“双过渡态”来同时催化产生6+4和4+2环加成产物。该特殊高阶环加成酶的发现，解答了“自然界中是否存在酶催化的高阶环加成反应”，这一持续五十余年的谜题。这类酶的发现将进一步拓展人们对周环反应酶的认识，启发科学家们将来利用和改造周环反应酶来实现有价值的分子转化。 成果于2019年4月以Letter形式发表于Nature。F1000评述该研究“鉴定首个高阶环加成酶，拓展了环加成酶的认知”，诺贝奖得主霍夫曼评述“这是在酶促反应中直接观察到的[6+4]环加成产物的首个例子……，该研究对酶促高阶环加成研究具有深远影响”。

磷脂酶D（PLD,EC 3.1.4.4）是一类广泛存在于各种生物体的酶，具有水解作用和磷酰基转移作用（见图1）。作为一种酶制剂，PLD的转磷脂酰活性尤为重要，被用于制备具有生物活性的稀有磷脂。其中，以大豆磷脂酰胆碱（PC）为底物，PLD酶法制备磷脂酰丝氨酸（PS），受到广泛关注。PS作为脑健康营养补充剂，相继被美国FDA、日本HBM和中国国家卫生计生委所认证，列为新资源食品。相较于提取自牛脑和植物的PS，生物酶法制备的PS，避免了食品安全和植物源含量低的问题。进一步，一些新的结构和功能磷脂，通过PLD转磷脂酰反应被合成出来，例如，磷脂酰鲨肝醇、磷脂酰葡萄糖、心磷脂类似物、磷脂酰酪醇、磷脂酰萜烯和磷脂酰丝氨醇，它们中一些具有抗癌和抗氧化活性。 直到现在，受限于磷脂酶D来源不足和价格高（链霉菌属PLD，≥150 units/mg，6516.9¥/1000 U，Sigma公司），其工业上的广泛应用受到限制。例如，文献报道的PLD最高产量在104-105U·L-1，而制备转化得到每公斤PS，需要2.6×106U的PLD。这一障碍的主要原因是高水平表达的PLD对宿主的严重细胞毒性，导致细胞死亡。 历经5年时间，从上游到下游整体设计，我们解决了毒性蛋白（磷脂酶D，PLD）异源表达难的问题（质粒不稳定、蛋白合成时间短、细胞生长抑制和裂解），PLD生产达到目前世界最高水平106U·L-1(748 mg·L-1)（提高20倍）；同时发展一种简单有效提取重组磷脂酶D的方法（无需破碎、无需添加溶菌酶和有机溶剂、室温进行），PLD生产成本有望降低20倍以上。按照实验室规模的一台5 L发酵罐，年产量可以提供3.5×108U的磷脂酶D，满足100 kg的PS转化需求计算（不计算PLD重复利用率），扩大反应器体积至100-1000 L，PLD产量可满足制备2-20吨PS的需求。

本发明提供一种巴斯德毕赤酵母、产生的耐高温蛋白酶及应用，属于微生物技术领域；本发明通过选育一种可产生耐高温酶的巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)AN‑PK‑9K‑GS115，然后将其进行培养，从发酵液中提取耐高温蛋白酶，将其用于羽毛粉的水解，可以有效水解羽毛粉，将其中蛋白质组分高效降解为小肽成分或者氨基酸成分，从而提高蛋白质的消化率，增加采食量，提高动物健康水平。 （注：本项目发布于2019年）

本发明提供了一种固定化磷脂酶A1在制备磷脂DHA中的应用，具体过程为，六水硝酸钴和2‑甲基咪唑分别溶于无水甲醇得到六水硝酸钴溶液和2‑甲基咪唑溶液，将2‑甲基咪唑溶液滴加至六水硝酸钴溶液中，搅拌反应、静置、干燥，得到ZIF‑67纳米材料，将ZIF‑67纳米材料于磷酸钠缓冲液中混悬，加入磷脂酶A1溶液，调节pH，置于摇床孵育，离心、干燥，获得ZIF‑67纳米材料固定化磷脂酶A1；将游离脂肪酸和大豆卵磷脂组成的底物和固定化磷脂酶A1在有机反应体系中进行催化反应，分离纯化获得磷脂DHA。固定化磷脂酶A1，稳定性好，催化制备磷脂DHA，DHA掺入率高达51.04%。

低分子量肝素(LMWH)是临床上最主要的天然抗凝剂，目前主要是通过动物来源的肝素进行酶降解制得。欧洲药典要求 LMWH 的分子量为 6000~8000，质量控制是生产 LMWH 的重要环节。而肝素酶的活性和利用率直接影响 LMWH 生产成本和产业经济。 本项目组利用融合肝素酶 I (Hep I)与甲壳素之间的亲和作用，实现酶的循环利用，同时融合酶活性和稳定性提高。利用绿色溶剂体系制备形态完好、尺寸均一的甲壳素微球。用固定化酶制备的 LMWH 产品达到欧洲药典要求，实现了分子量可控，生产过程可实时监测。该项目将对 LMWH 产业的绿色和经济生产提供技术支持。目前已发表 SCI 论文 2 篇，并与相关企业开展了合作。 

产品概述： 微机等温全自动量热仪主要由恒温式量热仪及微机测控系统等部分组成， 是由计算机系统自动控制,并能进行数据采集、通信、数据处理；基于数据库技术方便历史数据的查阅及打印；数据重算功能，硫、氢、水分含量可后期输入重算，提高测试效率；具有测量精度高、重复性好、操作简便、使用可靠等特点。 适用范围： 适用于油品、饲料、电力、煤炭、冶金、石化、煤化、水泥、造纸、地质勘探、农牧、医药科研、教学等行业或部门测量煤、石油、水泥黑生料、粮食、饲料等固态或液态可燃物的热值。 符合标准： GB/T213-2008《煤的发热量测定方法》 GB/T384-1981《石油产品热值测定法》 GB/T30727-2014《固体生物质燃料发热量测定方法》 JC/T1005-2006《水泥黑生料发热量测定方法》 ASTM D5865-2007《煤与焦炭总热值的标准试验方法》 GB/ T14402—2007《建筑材料及制品的燃烧性能燃烧热值的测定》 GB/T 30991-2014《智能氧弹式热量计通用技术条件》 JJG 672-2018《氧弹热量计检定规程》 GB/T483-2007《煤炭分析实验方法一般规定》； GB/T 31423-2015 《氧弹热量计性能验收导则》； ASTM D5865-13《煤与焦炭的发热量测定方法》 CEN/TS 14918 《固体生物燃料发热量测定方法》 BS EN 15400-2011 《固体回收燃料-发热量测试》 IS: 1350-1970 《煤与焦炭的测定方法》 ISO 9001:2008《质量管理体系认证》 ISO 1928-2009《固体矿物燃料-用弹式量热计测定总值并计算净热值》的要求。 产品特点： 1、采用独特的超大水箱循环系统(更加环保、无污染、无噪音)，可根据前次发热量决定制冷量，平衡循环水系统，可连续不间断实验，自动使水温保持相对恒定，无须人工调节水温。减少环境对试验结果的影响，实验结果更加准确; 2、采用进口隔热材料，有效地隔绝外部环境的影响，仪器抗干扰能力更强; 3、采用高精度的探针式电子量杯，无须人工称量水重，自动测量内筒水量。重复wu差<0.5g，水量更准确，试验时间更短、快速准确、操作简单方便; 4、点火丝自动判别功能，准确判断出点火丝的不良状态; 5、可接入实验室管理系统，实现天平数据不落地、测试结果备份和上传; 6、针对固废类样品可选配特制氧弹、坩埚等配件; 7、可选配氧弹气体收集装置，用于氧弹内气体收集 8、支持点火丝和棉线两种点火方式，点火丝自动判别功能，准确判断出点火丝的不良状态; 9、强大的数据处理、报表统计与打印功能，可接入实验室管理系统，实现天平数据不落地、测试结果备份和上传，可联网、联天平。 技术参数 测温范围：5℃～40℃ 精密度：≤0.1% 热容量稳定性：一年内热容量变化≤0.2% 准确度：优于GB/T213-2008《煤的发热量测定方法》 温度分辨率：0.0001℃ 单样测试时间：≤13min(经典法)、≤10min(快速法) 工作电源：AC 220V±22V/50Hz 功    率：≤0.5kW 整机尺寸：750×480×450mm 整机重量：45kg

可以量产/n成果简介：本工艺酿制的蜂蜜酒的感观品评结果：干型蜂蜜酒：浅黄色，蜜香及发酵酒突出，落口柔和，甘爽，酸适中，具有蜂蜜酒（干型）典型风格。半干型蜂蜜酒：浅黄色，清亮透明，蜜香郁雅，酸甜爽口，酒体协调，回味长，具有蜂蜜酒典型风格。应用前景：随着蜂蜜酒研发工作的深入开展，蜂蜜酒的发酵工艺更加优化，发酵速度加快，沉淀问题解决，蜂蜜酒必将成为继啤酒、葡萄酒、黄酒之后的第四大健康、美味、低度的酒类饮品，人们对蜂蜜酒的认识和需求也将逐步增加，因而蜂蜜酒的生产工艺必将得到广泛的应用和发展。

RNA病毒一直给人类健康带来巨大威胁。分节段负链RNA病毒（sNSV）通过自身携带的RNA聚合酶抢夺宿主细胞mRNA的5’端帽子结构，转录为病毒mRNA，合成的病毒mRNA是由宿主基因和病毒基因组成的嵌合mRNA。此过程被称为“Cap-snatching”，是sNSV复制周期中的关键环节。 一直以来，人们认为：病毒mRNA翻译的蛋白只包含病毒基因的开放阅读框（ORF），宿主来源的mRNA序列的作用是其5’端帽子结构可供宿主细胞翻译体系识别，其他宿主源遗传信息没有合成病毒蛋白的功能。 该研究揭示了病毒编码蛋白的新机制。 研究发现，病毒抢夺过来的宿主源mRNA片段，不仅起到5’端帽子结构的作用，而且这些宿主源mRNA片段包括起始密码子（AUG），宿主细胞可以从宿主的AUG开始翻译，编码两类宿主与病毒的嵌合蛋白。若宿主源AUG与原有病毒蛋白ORF在同一读码框中（in-frame），产生的蛋白为 N 端延长的宿主与病毒嵌合蛋白； 若宿主源AUG与原有病毒蛋白ORF不在同一读码框中（off-frame），产生的蛋白为新型的嵌合蛋白（Novel host-virus encoded proteins）。 进一步研究结果发现：流感病毒感染细胞后可以产生上述两类嵌合蛋白，这些嵌合蛋白可以诱导T细胞反应，并且与病毒的毒力相关。该研究提示，这种新的病毒蛋白编码机制可能不仅仅局限于流感病毒，在其他人类病毒、动物病毒和植物病毒中也广泛存在这种宿主与病毒嵌合蛋白的编码机制。 本研究是由美国纽约西奈山伊坎医学院（Icahn School of Medicine at Mount Sinai）牵头，多国科研工作者共同合作完成。

本发明提供了一种单链片段抗体-多肽融合蛋白及其应用,该蛋白是一种具有结合 Her2受体和携带抗癌siRNA药物双向功能的融合蛋白,可以作为抗癌siRNA的药物 载体。其中,单链片段抗体为Her2-ScFv,多肽为鱼精蛋白片段多肽。该单链片段抗 体-多肽融合蛋白的序列如SEQ ID NO.1所示的序列。本发明构建的Her2单链片段抗 体与鱼精多肽的融合蛋白具有结合Her2受体和携带抗癌siRNA药物的双向功能。本 发明的融合蛋白能把抗癌siRNA药物定向导入目标癌细胞中,开发了非病毒载体工 具,加速RNAi技术应用于临床。