本发明公开一种用于毛细管色谱内壁修饰固定相及其制备方法,其采用纳米SiO2颗粒作为修饰试剂,采用多层组装法在毛细管内壁修饰纳米SiO2修饰层,修饰好的纳米SiO2修饰层的厚度可控、修饰层厚度可在160~600nm间调节,有效地解决了毛细管电色谱的固定相柱容过低的问题。本方法一次修饰可获得6~7层纳米颗粒修饰层,三次修饰即可达到22~23层,修饰效率高,修饰时间短,毛细管内径选择范围广,是一种制备毛细管开柱的理想方法。