本发明属于生物技术领域,具体涉及一种枯草芽孢杆菌的简易迭代编辑工具及其应用。该工具包括两个质粒:pQ‑Cas9n和pC‑TS。pQ‑Cas9n质粒包含Cas9n基因和诱导型启动子,用于表达Cas9n蛋白。pC‑TS质粒包含温敏性复制蛋白,可以实现质粒的温度筛选消除。该工具实现了高效的基因编辑,显著缩短了编辑周期,并支持多基因的快速打靶和编辑,满足了复杂基因组编辑的需求。同时,本发明采用双质粒系统,通过温敏性复制蛋白实现了质粒的温度筛选消除,简化了质粒消除和再引入的步骤,本发明支持多轮迭代编辑,在编辑完成一个基因后,可以快速消除质粒并引入新的质粒进行新的位点编辑,实现了高效的多轮编辑。
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