抗M3型受体变构肽抗体测定在干燥综合征诊断中的应用

干燥综合征（Sjögren’s Syndrome，SS）是一种以侵及泪腺和唾液腺等外分泌腺为特征的全身性自身免疫疾病。该病最常见的临床表现为眼干、口干，并可累及肺、肾脏、淋巴系统、血管及肝脏等器官。此病无明显的地区分布差异，可发生于任何年龄，以40-60岁，特别是绝经后的女性居多，男女之比为1:9。在我国的患病率为0.77%，在老年人群中的患病率高达4%，全国有近800万患者。

目前在临床上应用的SS特异性自身抗体，如SSA、SSB抗体，存在敏感性低，易漏诊的弊端，不能满足临床需求。本团队经过多年研究发现了可以用于干燥综合征诊断的血清学特异性抗原—AM3RP，根据该抗原的抗原表位合成的变构肽可以特异性的识别干燥综合征患者血清中的特异性抗体—抗AM3RP抗体。抗AM3RP抗体在原发性干燥综合征（pSS）具有很高的敏感性和特异性，其中，IgG型抗AM3RP抗体在pSS患者中的敏感性为84.6%，特异性为92.2%；IgA型抗AM3RP抗体在pSS患者中的敏感性为和特异性分别为46%和87%。基于目前SS在我国患者数量庞大，又缺乏相应的特异性诊断价值高的生物学标志物，本项目临床应用前景广阔。

具体实施方式

实施例1 AM3RP的设计及合成

前述的研究工作(1-4)已经证明，从sigma公司购进sf9细胞真核表达的人胆碱能M3型受体蛋白能够特异性的结合干燥综合征患者体内的胆碱能M3型受体蛋白抗体，然后通过特定的方法可以将其检出。本发明的试验中首先利用Flechsler等(5)报道的固相合成法合成了一条共18个氨基酸的AM3RP。

研究表明：上述AM3RP具有能特异性的识别干燥综合征患者血清中的特异性抗体的作用，对干燥综合征的诊断具有重要的意义。

实施例2 AM3RP对干燥综合征患者血清中抗体的检测

本研究采用酶联免疫吸附法（即ELISA法）对干燥综合征、类风湿关节炎（RA）、系统性红斑狼疮（SLE）患者血清中的抗AM3RP抗体进行检测，以评价该变构肽抗体在各种疾病中的分布。

将AM3RP包被于酶联免疫吸附微孔板上，与待测血清一起孵育，如果血清中存在抗AM3RP抗体，该抗体会与包被的固相抗原结合，形成抗原-抗体复合物。将未结合的抗体及其它成分冲洗干净后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗人IgG抗体（IgG-HRP）一起孵育，此时IgG-HRP与抗原-抗体复合物结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，洗去未结合的成分，加入底物，若血清中含有抗AM3RP抗体，则会显出特定的颜色，且抗体滴度越高颜色越深。加终止液后在450nm波长下测定OD值，根据标准曲线可计算出待检样本的抗AM3RP抗体浓度。

检测原理示意图见图1。

图一：抗AM3RP抗体检测示意图