血清细胞外囊泡miR-503-5p在制备2型糖尿病发病的诊断试剂盒中的应用

本发明涉及分子诊断技术领域，具体涉及到血清细胞外囊泡miR‑503‑5p作为2型糖尿病标志物及其应用。
2型糖尿病(Type 2diabetes ,T2D)是一种以慢性高血糖为主要特征的全身性代谢紊乱综合征。在健康成年个体中，机体血糖稳态的维持需要胰岛和外周组织共同维持，当血糖升高时胰岛β细胞分泌胰岛素作用于外周组织，促进外周组织吸收和利用葡萄糖使血糖降低；当β细胞出现功能障碍或胰岛素作用减弱就会导致血糖稳态被破坏，促进2型糖尿病的发生。临床研究表明，在糖尿病发病前胰岛素抵抗就持续存在，而β细胞能够代偿胰岛素抵抗分泌过量胰岛素，一旦β细胞失去代偿能力，就会使患者出现高血糖症状，即发生糖尿病。因此，寻找一种在糖尿病发病前即稳定存在，并且具有显著作用的分子标志物，对2型糖尿病的防治具有重要的临床意义。
MicroRNA(miRNA)是一种短链非编码小分子RNA，长度约为20‑24个核苷酸，其经典作用方式是与靶基因mRNA的3’‑非编码区(3’‑UTR)结合，通过促进靶基因mRNA降解或抑制其翻译，实现基因转录后水平的调控作用。多种细胞都能合成miRNA，而某些miRNA能被直径为30‑150nm的具有磷脂双分子层的分泌型囊泡样小体，即细胞外囊泡包裹并分泌至胞外。当细胞外囊泡进入细胞间质，可以被临近的受体细胞吸收，或随体液运输到远端作用于不同的细胞。细胞外囊泡的磷脂双分子层能够保护其包裹的内容物，使细胞外囊泡中的分子不容易被破坏，能相对稳定地存在于体液中，因此细胞外囊泡携带的miRNA可以作为理想的疾病生物标志物。
血液是机体组织与细胞间信号交流的重要信使，疾病发生时多种类型细胞分泌的细胞外囊泡携带miRNA进入血液，为疾病的体液检测提供了新的思路。目前尚未有研究报道
miR‑503‑5p表达和2型糖尿病之间的关系。
本发明提供血清细胞外囊泡miR‑503‑5p作为2型糖尿病发病的分子标志物的应用。本申请研究发现胰岛β细胞中miR‑503‑5p表达增加不仅能够被分泌出去，经血液循环进入外周组织造成胰岛素抵抗，还能损伤β细胞功能。我们收集了病理模型鼠、健康成年人及糖尿病人血清细胞外囊泡，经绝对定量PCR检测其中miR‑503‑5p的含量，结合小鼠的发病进程，认为miR‑503‑5p是2型糖尿病发病早期就存在的分子标志物。
具体地，本发明提供血清细胞外囊泡分子标志物hsa‑miR‑503‑5p在制备2型糖尿病诊断试剂盒中的应用，其中hsa‑miR‑503‑5p的序列如SEQ ID NO .1所示：GGGGUAUUGUUUCCGCUGCCAGG。
所述2型糖尿病诊断试剂盒为定量检测hsa‑miR‑503‑5p表达量的试剂盒。
本发明发现在糖尿病发病前阶段，高脂喂养的小鼠血清细胞外囊泡中miR‑503‑5p含量显著增高，虽然此时小鼠的胰岛功能是增强的，但是肝脏和脂肪组织中miR‑503‑5p的靶基因表达降低，提示血清细胞外囊泡中miR‑503‑5p含量增加与小鼠的胰岛素抵抗的加重具有密切相关性。而在人血清细胞外囊泡中，检测发现相对于健康成年人你，miR‑503‑5p在2型糖尿病患者血清细胞外囊泡中含量显著增加，并且miR‑503‑5p含量增加与患者血糖升高的程度呈正相关。而在人胰岛中过表达hsa‑miR‑503‑5p能造成β细胞糖刺激的胰岛素分泌障碍，说明胰岛中miR‑503‑5p含量持续增加可能会造成β细胞功能障碍，造成糖尿病的发生。因此，本发明阐述了血清细胞外囊泡miR‑503‑5p含量增加，与2型糖尿病发病进程中胰岛素抵抗的加重，以及β细胞功能损伤导致血糖稳态被破坏疾病发生的过程密切相关，2型糖尿病的诊断及分型治疗提供了强有力的分子生物学基础，具有深远的临床意义和推广价值。