本发明公开一种以发根农杆菌介导的大豆毛状根诱导转化方法,包括如下步骤:选取大豆播种后在真叶即将展开时的幼苗,在子叶节下0.2‑0.8cm处的下胚轴处进行横切,在带子叶的幼苗的下胚轴切口处蘸发根农杆菌菌液后扦插,并浇注含所述发根农杆菌菌液的发根诱导营养液进行培养。本发明的优点节省大豆种植基质和空间;毛状根产生的时间缩短,节省了操作步骤和时间,尤其是在研究根瘤菌和大豆之间互作时,减少了其它根瘤菌的污染。