一种非人类胚胎细胞的冷冻优化体系及应用

1. 痛点问题

目前，关于胚胎细胞冷冻保种体系的产品价格贵、实验成本高、保存费用高。传统冷冻保种体系操作流程复杂，多使用冻存管、商品化载杆；冷冻保护剂毒性相对较高的同时，冷冻保存占用液氮罐空间较大。本项成果提供了一种操作简单、高回收率、高成活率、高存储率的技术体系，使用了低毒的冷冻保护剂，降低对于冷冻细胞的损伤，保证技术人员的职业健康，提高了液氮罐空间使用效率。

2. 解决方案

本项成果的技术核心包括：自主研发了冷却速率高的放置冷冻保种胚胎细胞的载体、凹槽麦管。使用自制配件将麦管按照特定角度切割出凹槽，将胚胎细胞放置于凿槽前端，直接接触液氮加快冷却速率，更易于回收不丢失胚胎细胞，可达到近100%回收率。使用低毒的冷冻保护剂，提高了冷冻胚胎细胞的发育率。使用自主研发的HTF受精液作为冷冻保护剂的STOCK液，提供更充分的细胞养分，利于后续胚胎细胞的发育。

未来的产品主要涉及非人类胚胎细胞冷冻保种试剂盒，包括冷冻液、复苏液和凹槽麦管。预期可以形成实验动物繁育和冷冻保种的相关试剂盒，并可以提供技术支持和实验方案设计和分析。

图.不同冷冻保护剂基础液对B6小鼠胚胎细胞冷冻保种的影响

本项成果属于资源冷冻保种领域，随着科学研究的不断发展，实验动物的需求量越来越多，实验动物资源越来越多样化，急需一种操作简单、高回收率、高成活率、高存储率的冷冻保种技术体系，用于保存珍贵的实验动物资源，建立稳定有效的资源库。

目前，全国有三千余家实验动物生产和使用单位，产品可用于小鼠的胚胎冷冻操作实验。

本项成果涉及的技术体系从2022年开始使用，技术成熟度高。在同类胚胎冷冻保种技术体系中，具有操作简单、时间成本低、实验效率高、液氮存储占用空间低等特点，同时胚胎复苏相对可以得到更多的活体小鼠，更符合动物福利原则。