RAA让猪病检测更便捷

成果以临床上多发的三种病原-经典猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）和猪格拉瑟氏菌（GPS）为研究对象，已初步组装出CSFV、PRV和GPS的重组酶介导的等温扩增（RAA）快速检测试剂盒，可以满足临床上早期、快速诊断以及基层和现场即时检测的实际需求，解决了常用诊断方法操作复杂、耗时长、对仪器设备要求较高等不足。且组装出的CSFV、PRV-RAA检测试剂盒，并已用于规模化养猪场断奶仔猪以上两种病原感染情况的调查。

01检测CSFV的RAA引物对和探针组合及试剂盒

本项目针对CSFV毒株的高度保守区域设计引物和exo探针，组装了CSFV real-time RAA检测试剂盒。该试剂盒特异性好，与其他重要的猪病原体无交叉反应；最低可检测到2个半数组织培养感染剂量（TCID50）的CSFV RNA/反应，批内和批间试验变异系数均小于8.0%，重复性好。对135份临床样品进行检测，real-time RT-RAA和TaqMan real-time RT-PCR的符合率为98.52%（133/135）。

02检测PRV的RAA引物对和探针组合及试剂盒

本项目针对PRV毒株的gE基因高度保守区域设计引物和exo探针，组装了PRV real-time RAA检测试剂盒。该试剂盒特异性好，与其他重要的猪病原体无交叉反应；最低可检测到3个TCID50的PRV DNA/反应，批内和批间试验变异系数均小于9.0%，重复性好。对206份临床样品进行检测，real-time RAA和TaqMan real-time PCR的符合率为97.57%（201/206）。

03检测GPS的RAA引物对和探针组合及试剂盒

本项目针对GPS毒株的infB基因高度保守区域设计引物和exo探针，组装了GPS real-time RAA检测试剂盒。该试剂盒特异性好，与其他重要的猪病原体无交叉反应；最低可检测到67 copies/反应，批内和批间试验变异系数均小于9.0%，重复性好。对108份临床样品进行检测，real-time RAA和TaqMan real-time PCR的符合率为100%（108/108）。

为了解全国规模化猪场CSFV、PRV在断奶仔猪群中的感染情况，利用本项目所组装的RAA试剂盒对来自全国21个省（自治区）的352个猪场的2034份断奶仔猪血清样本进行了检测，为猪场相关疫病的防控提供了参考。本项目的猪伪狂犬病病毒、经典猪瘟病毒和猪格拉瑟氏菌的RAA试剂盒只需在42℃恒温条件下反应30min即可完成，且整个反应过程对仪器设备要求低，耗时短，操作简单，扩增所得产物可以通过便携式蓝光仪进行肉眼可视化的结果判断，适用于基层现场诊断和即时检测等方面，可以真正实现便携式快速核酸检测，可为以上三种病原的诊断、防控和区域净化提供技术支持。