本发明提供了用于检测不同基因型鸡新城疫病毒(NDV)的试剂盒,属于RT‑PCR检测技术领域。本发明的试剂盒含有一对特异性引物,其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑2所示。本发明还提供了检测不同基因型鸡新城疫病毒的方法。本发明试剂盒和检测方法具有高特异性、高灵敏度、高效率、通用性好、低成本的特点,可在6h内对临床病料进行快速鉴别诊断,本发明为NDV的早期快速诊断和开展分子流行病学调查提供技术手段,以更好地指导养禽生产中对该病的防控。