本发明公开了一种基于单光场相机的微尺度流动三维速度场的测量装置及方法,其中测量装置包括双脉冲激光器、荧光显微镜、相机系统、同步控制器和计算机,其中计算机用于存储CCD相机获得的光场图片;选择两帧时间间隔为Δt光场照片,利用计算的点扩散函数,反卷积重建出示踪粒子的三维位置信息;通过三维互相关算法得出微流场的三维速度场信息。本发明采用单相机系统与传统荧光显微镜结合,实现微尺度流场的三维速度场测量,系统无需深度扫描,可以对非定常流动或非周期性流动的流场测量。