转基因骨髓间充质干细胞结合支架修复退变椎间盘技术

已成功构建Ad-GDF-5和Ad-GFP；已成功构建小肠粘膜下层和壳聚糖－聚己酸内酯支架；目前已完成动物椎间盘退变模型的制作，间充质干细胞的提取，分离，培养和鉴定；已制备转基因MSCs，完成转基因MSCs的细胞特性，其和支架之间的相互影响。

（1）、重组腺病毒Ad-GDF-5以及对照空载腺病毒Ad-GFP制备的检测采用PCR、荧光显微镜、western-blot方法；（2）、采用相应物理化学工艺处理材料制备小肠粘膜下层和壳聚糖－聚己酸内酯支架，采用电子显微镜观测（3）、间充质干细胞（MSCs）的采集，培养和鉴定，运用特定抗体采用流式细胞术鉴定；（4）、用Ad-GDF-5和Ad-GFP分别转染MSCs得到转基因MSCs，荧光显微镜、荧光计数器及western-blot检测转染情况；（5）、转基因的MSCs复合支架的体外培养，电子显微镜、DNA含量检测等方法研究细胞支架复合情况；（6）、构建动物退变椎间盘模型，大体及切片染色检测退变情况；（7）、体内试验部分主要通过大体观察、组织切片、原位免疫荧光、western-blot等方法检测。