目前,沙门菌的检测主要还是采用传统的细菌学方法,通过前增菌、选择性增菌、分离培养、生化试验以及血清学鉴定的步骤一步一步进行检测,工作量大且耗时长。PCR及Real Time PCR等分子生物学技术虽然具有快速、简便等大量优点,却较少应用,主要原因是以DNA为模版的PCR及Real Time PCR技术并不能区分细菌的死活细胞,样品中存在的死细胞可能导致假阳性结果。本课题将EMA对死活细胞的鉴别作用与Real Time PCR的灵敏度、特异性相结合,有效克服了DNA分子检测手段不能鉴别死活细胞的弊端,在实现检测的快速、简便的同时大大提高了结果的准确性。确证了EMA-Real Time PCR可实现实际样品中沙门菌活细胞的快速测定,可将EMA-Real Time PCR推广到实际检测工作中,如此便可大大缩短检测所需的时间,节省大量的人力、物力。研究成果具有重大的应用前景。 社会效益:EMA-Real Time PCR可用于实际样品中沙门菌活细胞的快速检测,建立一种快速检测病原菌的新方法体系,用于实际的检测工作中,如此不仅可以减少食品安全日常监测的工作量,更重要的是,在突发性食物中毒事件中,大大缩短了病原菌检测所需时间,提高了反应效率,为突发性公共卫生事件的解决提供更好的技术平台。
节约时间(国家标准方法程序繁琐,一般需要4-7天才能完成检测,无法满足突发公共卫生事件应急处理快速反应的需求),应急快速处理。 国内先进。
本研究将染料EMA与与Real Time PCR技术相结合,建立一种适用于沙门菌活细胞检测的EMA-Real Time PCR新方法。通过对大量不同种类样品的分析,可验证所确立方法实际应用的可行。