重组大肠杆菌生产磷脂酶D及转酯化产品开发

磷脂酶D（PLD,EC 3.1.4.4）是一类广泛存在于各种生物体的酶，具有水解作用和磷酰基转移作用（见图1）。作为一种酶制剂，PLD的转磷脂酰活性尤为重要，被用于制备具有生物活性的稀有磷脂。其中，以大豆磷脂酰胆碱（PC）为底物，PLD酶法制备磷脂酰丝氨酸（PS），受到广泛关注。PS作为脑健康营养补充剂，相继被美国FDA、日本HBM和中国国家卫生计生委所认证，列为新资源食品。相较于提取自牛脑和植物的PS，生物酶法制备的PS，避免了食品安全和植物源含量低的问题。进一步，一些新的结构和功能磷脂，通过PLD转磷脂酰反应被合成出来，例如，磷脂酰鲨肝醇、磷脂酰葡萄糖、心磷脂类似物、磷脂酰酪醇、磷脂酰萜烯和磷脂酰丝氨醇，它们中一些具有抗癌和抗氧化活性。 直到现在，受限于磷脂酶D来源不足和价格高（链霉菌属PLD，≥150 units/mg，6516.9¥/1000 U，Sigma公司），其工业上的广泛应用受到限制。例如，文献报道的PLD最高产量在104-105U·L-1，而制备转化得到每公斤PS，需要2.6×106U的PLD。这一障碍的主要原因是高水平表达的PLD对宿主的严重细胞毒性，导致细胞死亡。 历经5年时间，从上游到下游整体设计，我们解决了毒性蛋白（磷脂酶D，PLD）异源表达难的问题（质粒不稳定、蛋白合成时间短、细胞生长抑制和裂解），PLD生产达到目前世界最高水平106U·L-1(748 mg·L-1)（提高20倍）；同时发展一种简单有效提取重组磷脂酶D的方法（无需破碎、无需添加溶菌酶和有机溶剂、室温进行），PLD生产成本有望降低20倍以上。按照实验室规模的一台5 L发酵罐，年产量可以提供3.5×108U的磷脂酶D，满足100 kg的PS转化需求计算（不计算PLD重复利用率），扩大反应器体积至100-1000 L，PLD产量可满足制备2-20吨PS的需求。

厦门大学 2021-01-12

一种结核杆菌融合蛋白及其制备方法和应用

本发明所构建的融合蛋白EAMM能在大肠杆菌中稳定大量表达，经纯化得到纯度较高的蛋白；构建的亚单位疫苗免疫动物能产生针对结核杆菌特定抗原（ESAT-6、Ag85B、Mtb8.4和PPD）的特异性的细胞免疫和体液免疫应答，具有较强的免疫原性。

兰州大学 2021-01-12

猪圆环病毒 2 型-副猪嗜血杆菌多联多价灭活疫苗

本成果是将人工合成的表达猪圆环病毒 2 型 Cap 蛋白的核苷酸 序列克隆到杆状病毒表达载体中，构建重组杆状病毒，接种 Sf9 昆虫细胞，经 过悬浮培养、收获、过滤，二乙烯亚胺 BEI 灭活病毒液后，加入适宜的佐剂混 合乳化制成。并利用自主分离鉴定副猪嗜血杆菌病多价流行菌株，通过优化培 养工艺，提高副猪嗜血杆菌培养密度，成功研制了猪圆环病毒 2 型-副猪嗜血杆 菌多联多价灭活疫苗。 

青岛农业大学 2021-04-11

结核杆菌蛋白酶体调控复合体ATPase作用机理

Mpa六聚体除了与真核生物蛋白酶体调节颗粒Rpt1-Rpt6蛋白六聚体以及古细菌PAN蛋白六聚体具有一定的结构同源性之外，还具有一些明显不同的结构特征：（1）结核杆菌Mpa具有形成双环的两个串联寡核苷酸/寡糖结合（OB）结构域，而古细菌蛋白酶体相关ATPase调控颗粒（PAN）和真核生物蛋白酶体ATPase调控颗粒复合体（Rpt1-6）每个蛋白亚基都只具有单个OB结构域；（2）Mpa在具有蛋白酶体活化功能的C末端之前具有一个泛素样的β-grasp结构域，而古细菌PAN和真核生物Rpt1-6蛋白复合体并不具有这样的一个β-grasp结构域 由于β-grasp结构域的存在，Mpa六聚体中各个蛋白亚基C末端被埋在结构核心中而没有暴露在蛋白复合体结构的表面，这就影响了C末端的GQYL基序与20S 蛋白酶体复合体的对接，从而阻碍了六聚化的Mpa与七次对称的28聚体的蛋白酶体相互作用。我们通过功能研究进一步解释了为什么单独的Mpa六聚体在体外情况下不能有效结合蛋白酶体核心颗粒并启动蛋白质特异性降解，结合晶体结构域功能研究，我们提出了结核杆菌蛋白酶体ATPase调控颗粒Mpa与20S蛋白酶体复合体这一分子量超过1100KDa蛋白质机器的作用模型

南方科技大学 2021-04-13

双歧杆菌胞外多糖结构鉴定、功能评价及活性产品的研制

一、成果简介 “双歧杆菌胞外多糖结构鉴定、功能评价及活性产品的研制”受到国家高技术研究发展计划(863 项目)项目(编号：2008AA10Z324)与国家科技支撑计划项目(编号：2006BABO4A06)的资助。该研究以我国广西巴马百岁以上长寿老人肠道分离到的双歧杆菌及其胞外多糖(EPS)为材料，较系统、全面地进行了结构鉴定、功能评价及活性产品的研制。 

中国农业大学 2021-04-14

结核分枝杆菌融合蛋白 EAMMH、其构建、表达和纯化 方法及其应用

本发明成功将 EAMM 蛋白和抗原 HspX 在基因水平进行融合构 建了新的融合蛋白 EAMMH，并将该不带标签的融合蛋白成功进行表 达和纯化。EAMMH 融合蛋白以可溶形式表达，明显改善了 EAMM 以包涵体进行表达的状况。此外，EAMMH 蛋白融合了结核分枝杆菌 主要的生长期抗原和休眠期抗原，并可诱导较强的针对各期抗原的特 异性细胞免疫和体液免疫应答。小鼠结核分枝杆菌气雾攻击模型证 明，该新的融合蛋白疫苗具

兰州大学 2021-04-14

结核分枝杆菌融合蛋白EAMMH、其构建、表达和纯化方法及其应用

本发明成功将EAMM蛋白和抗原HspX在基因水平进行融合构建了新的融合蛋白EAMMH，并将该不带标签的融合蛋白成功进行表达和纯化。EAMMH融合蛋白以可溶形式表达，明显改善了EAMM以包涵体进行表达的状况。此外，EAMMH蛋白融合了结核分枝杆菌主要的生长期抗原和休眠期抗原，并可诱导较强的针对各期抗原的特异性细胞免疫和体液免疫应答。

兰州大学 2021-01-12

一种地衣芽胞杆菌及多阶段发酵的方法

本发明公开了一种地衣芽孢杆菌及多阶段发酵的方法，属于发酵工程技术领域；所述的地衣芽孢杆菌，其分类命名为地衣芽孢杆菌，菌种的拉丁学名是Bacillus?licheniformis，参据的微生物：NJWGYH?833051，保藏日期是2012年5月25日，保藏中心登记入册编号是CGMCC?No.6155。该方法主要包括：种子的活化、接种前准备及接种、多阶段溶氧控制过程、分批补料发酵阶段，以多阶段发酵生产地衣芽孢杆菌，使其菌体活力得到了大幅度提高。本发明操作简单，成本低，地衣芽孢杆菌菌体活力较高，有利于实现工业化生产。

南京工业大学 2021-01-12

具有预防糖尿病作用的鼠李糖乳酸杆菌 CCFM0528

本专利菌株为一株鼠李糖乳杆菌，被国家卫生和计划生育委员会列入可用于 食品的菌种名单，可广泛的应用于食品生产中，同时具有很广阔的药用前景。该 菌株具有 α-葡萄糖苷酶抑制活性，可影响葡萄糖转运相关蛋白 SGLT-1 和 GLUT- 2 的表达水平，可有效的预防模型小鼠 II 型糖尿病的发生，有效降低小鼠空腹 血糖和餐后血糖。糖尿病及代谢综合征的发病率在现代社会居高不下，α-葡萄 糖苷酶抑制剂广泛的被应用于糖尿病的治疗，利用具有 α-葡萄糖苷酶抑制活性 的乳酸菌预防及缓解糖尿病尚属首次，鼠李糖乳杆菌在食品中已经得到了广泛的 应用，该菌可被用于大宗食品及功能性食品的生产，开发具有预防及缓解 II 型 糖尿病的膳食补充剂，如乳酸菌饮料、发酵酸乳、发酵酸豆乳以及片剂、胶囊、 冻干粉等药物组合物，具有非常广阔的产业化前景，对于慢性疾病的预防和治疗，29 推动国民健康具有重大的意义，同时也具有巨大的潜在经济效益。

江南大学 2021-04-11

一种产角蛋白酶的粘金黄杆菌及其分离方法

本发明公开了一种产角蛋白酶的粘金黄杆菌及其分离方法。所述粘金黄杆菌拉丁名为Chryseobac？terium？L99，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC？No.2295。本发明公开了该菌的形态学特征为：菌体杆状，不产孢子，无运动性，革兰氏染色呈阴性。本发明公开了该菌的全细胞脂肪酸主要成份为：十三甲基十四酸47.59％，二羟基-13-甲基十四酸和(或)Ω-7-顺式-13甲基-十五酸15.72％，三羟基-15-甲基十六酸13.91％，Ω-9-顺式-14甲基棕榈酸9.48％。本发明还公开了该菌的16S核糖体DNA(16S？rDNA)全序列。本发明公开的分离方法包括三个步骤：普通营养培养基富集培养，以角蛋白为唯一碳氮源固体培养基初筛，以角蛋白为唯一碳氮源液体培养基的复筛。该方法快捷有效，所得菌种产酶能力强。

浙江大学 2021-04-13