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重组大肠杆菌生产磷脂酶D及转酯化产品开发
磷脂酶D(PLD,EC 3.1.4.4)是一类广泛存在于各种生物体的酶,具有水解作用和磷酰基转移作用(见图1)。作为一种酶制剂,PLD的转磷脂酰活性尤为重要,被用于制备具有生物活性的稀有磷脂。其中,以大豆磷脂酰胆碱(PC)为底物,PLD酶法制备磷脂酰丝氨酸(PS),受到广泛关注。PS作为脑健康营养补充剂,相继被美国FDA、日本HBM和中国国家卫生计生委所认证,列为新资源食品。相较于提取自牛脑和植物的PS,生物酶法制备的PS,避免了食品安全和植物源含量低的问题。进一步,一些新的结构和功能磷脂,通过PLD转磷脂酰反应被合成出来,例如,磷脂酰鲨肝醇、磷脂酰葡萄糖、心磷脂类似物、磷脂酰酪醇、磷脂酰萜烯和磷脂酰丝氨醇,它们中一些具有抗癌和抗氧化活性。 直到现在,受限于磷脂酶D来源不足和价格高(链霉菌属PLD,≥150 units/mg,6516.9¥/1000 U,Sigma公司),其工业上的广泛应用受到限制。例如,文献报道的PLD最高产量在104-105U·L-1,而制备转化得到每公斤PS,需要2.6×106U的PLD。这一障碍的主要原因是高水平表达的PLD对宿主的严重细胞毒性,导致细胞死亡。 历经5年时间,从上游到下游整体设计,我们解决了毒性蛋白(磷脂酶D,PLD)异源表达难的问题(质粒不稳定、蛋白合成时间短、细胞生长抑制和裂解),PLD生产达到目前世界最高水平106U·L-1(748 mg·L-1)(提高20倍);同时发展一种简单有效提取重组磷脂酶D的方法(无需破碎、无需添加溶菌酶和有机溶剂、室温进行),PLD生产成本有望降低20倍以上。按照实验室规模的一台5 L发酵罐,年产量可以提供3.5×108U的磷脂酶D,满足100 kg的PS转化需求计算(不计算PLD重复利用率),扩大反应器体积至100-1000 L,PLD产量可满足制备2-20吨PS的需求。
厦门大学 2021-01-12
一种巴斯德毕赤酵母、产生的耐高温酶及应用
本发明提供一种巴斯德毕赤酵母、产生的耐高温蛋白酶及应用,属于微生物技术领域;本发明通过选育一种可产生耐高温酶的巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)AN‑PK‑9K‑GS115,然后将其进行培养,从发酵液中提取耐高温蛋白酶,将其用于羽毛粉的水解,可以有效水解羽毛粉,将其中蛋白质组分高效降解为小肽成分或者氨基酸成分,从而提高蛋白质的消化率,增加采食量,提高动物健康水平。 (注:本项目发布于2019年)
华中农业大学 2021-01-12
固定化磷脂酶A1在制备磷脂DHA中的应用
本发明提供了一种固定化磷脂酶A1在制备磷脂DHA中的应用,具体过程为,六水硝酸钴和2‑甲基咪唑分别溶于无水甲醇得到六水硝酸钴溶液和2‑甲基咪唑溶液,将2‑甲基咪唑溶液滴加至六水硝酸钴溶液中,搅拌反应、静置、干燥,得到ZIF‑67纳米材料,将ZIF‑67纳米材料于磷酸钠缓冲液中混悬,加入磷脂酶A1溶液,调节pH,置于摇床孵育,离心、干燥,获得ZIF‑67纳米材料固定化磷脂酶A1;将游离脂肪酸和大豆卵磷脂组成的底物和固定化磷脂酶A1在有机反应体系中进行催化反应,分离纯化获得磷脂DHA。固定化磷脂酶A1,稳定性好,催化制备磷脂DHA,DHA掺入率高达51.04%。
南京工业大学 2021-01-12
基于固定化酶生产低分子量肝素的新工艺
低分子量肝素(LMWH)是临床上最主要的天然抗凝剂,目前主要是通过动物来源的肝素进行酶降解制得。欧洲药典要求 LMWH 的分子量为 6000~8000,质量控制是生产 LMWH 的重要环节。而肝素酶的活性和利用率直接影响 LMWH 生产成本和产业经济。 本项目组利用融合肝素酶 I (Hep I)与甲壳素之间的亲和作用,实现酶的循环利用,同时融合酶活性和稳定性提高。利用绿色溶剂体系制备形态完好、尺寸均一的甲壳素微球。用固定化酶制备的 LMWH 产品达到欧洲药典要求,实现了分子量可控,生产过程可实时监测。该项目将对 LMWH 产业的绿色和经济生产提供技术支持。目前已发表 SCI 论文 2 篇,并与相关企业开展了合作。 
江南大学 2021-04-13
高性能角蛋白酶的高效表达与应用研究
角蛋白酶是一种特异性蛋白酶类,可降解结构复杂、硬质难溶的角蛋白,具有多种优良的催化特性,在生物加工、绿色制药、废弃生物质处理、生物制革、生态纺织、洗涤剂等实际应用中备受关注,被认为是有着巨大应用潜力和市场前景的新一代蛋白酶类。 本项目从角蛋白酶基因挖掘、高效表达、性能改造及其应用研究等方面开展了一系列工作。课题组目前建立了角蛋白酶资源库,是我国拥有角蛋白酶基因资源产权最多和最具多样性来源的单位;实现了角蛋白酶基因在大肠杆菌及枯草芽孢杆菌等外源宿主中的克隆及高效表达;在 5L 罐上发酵酶活最高可达10000 U/mL 以上,是目前文献报道的重组角蛋白酶表达最高水平;项目已完成了 1M3 规模中试试验,成本降低 30%以上。在应用方面,本项目成功将角蛋白酶用于生物法制备纳米银粒子 AgNPs,与传统化学法相比,酶法合成的纳米银具有更好的抑菌活性。另外,项目组已首次开发出无胶原活力的高特异性角蛋白酶,具有高角蛋白活力,不会对皮革胶原造成破坏,能保护胶原结构完整性,可开发出不伤及皮肤真皮的洗涤剂产品、药品及化妆品,在生物制革领域也具有极大应用价值,可缓解制革工业中的烂皮现象;同时本研究所开发的角蛋白酶在活性多肽制备中也表现出良好的应用前景。
江南大学 2021-04-13
东南大学杨洪教授课题组在拓扑学和智能材料交叉领域取得重要进展
近日,东南大学智能材料研究院、化学化工学院杨洪教授课题组在光控软驱动器研究领域取得重要进展,将拓扑学设计与液晶弹性体材料相结合,开发了一种具有多模态、自维持、可调谐运动的软驱动器。研究成果发表在国际顶级期刊《德国应用化学》上,并被选为VIP论文。
东南大学 2023-05-19
通过增大狄拉克半金属约瑟夫森结的几何尺寸将电子输运维数降到拓扑铰链态
近日,南方科技大学量子科学与工程研究院院长、中国科学院院士俞大鹏团队与北京大学、荷兰特文特大学等合作,在狄拉克半金属-超导体异质结量子调控方面取得研究新进展,相关成果以《通过增大狄拉克半金属约瑟夫森结的几何尺寸将电子输运维数降到拓扑铰链态》(“Reducing Electronic Transport Dimension to Topological Hinge States by Increasing Geometry Size of Dirac Semimetal Josephson Junctions”)为题发表在《物理评论快报》(Physical Review Letters)上。 研究团队利用体态、表面态和棱态具有不同超导相干长度的性质特点,通过增长沟道长度,逐步实现从体态到表面态、再到棱态的超导电流的传导。
南方科技大学 2021-04-11
一种高速铁路CRTS-II型板式无砟轨道桥台水平位移测试方法
一种高速铁路CRTS-II型板式无砟轨道桥台水平位移测试方法,其步骤为:a)测试端刺水平位移,b)测试摩擦板水平变形,c)测试相对于摩擦板的桥台水平位移,d)测试温度校正值,e)计算桥台水平位移。温度校正位移传感器测试值实现了端刺与摩擦板上基准杆端部连接的位移传感器测试值的校正,该测量方法原理清晰、测量误差小、精度高,满足高速铁路CRTS-II型板式无砟轨道桥台水平位移的测试。
西南交通大学 2016-10-20
一种聚集增强发光效率的NIR-II荧光J-聚集体及其应用
本发明提出一种聚集增强发光效率的NIR‑II荧光J‑聚集体及其应用。AS5Br(δ)能够在水介质中轻松形成J‑聚集体,无需复杂的制备过程且具有聚集诱导荧光效率增强特性。经过转化成为J‑聚集体纳米粒子AS5Br(δ)NPs后,实现了迄今为止报道的NIR‑II荧光J‑聚集体中量子产率最高的记录,NIR‑II荧光量子产率达到5.2%。AS5Br(δ)NPs的荧光量子产率甚至超过了AS5Br(δ)在最佳溶剂中的荧光量子产率,克服了将NIR‑II荧光J‑聚集体转化为生物相容性纳米粒子面临的难题,在小鼠的血管和肿瘤部位进行NIR‑II成像以及肿瘤切除实验中,展现了其作为超亮NIR‑II荧光团的潜力。
南京工业大学 2021-01-12
新型高效MnxV2O5+x基可见光催化剂的催化机理及动态表征
环境污染和能源短缺已成为当今世界面临的最主要危机,人们不断探究治理环境和开发可再生能源的新方法。于1972年,Fujishima和Honda报道采用TiO2光电极和铂电极组成光电化学体系使水分解为氢气和氧气,从而开辟了半导体催化这一新的研究领域。近些年,将有机污染物降解已经成为能源环境科学领域的研究热点。该研究对于治理水污染,保护水环境具有重要的科学意义。 主要通过化学方法可控的调控可见光催化材料纳米晶体的尺寸和形貌,合成具有规则形貌和特定裸露晶面的可见光催化材料(例如纳米棒、纳米带、纳米片、纳米八面体和纳米六面体等),并在此基础上进一步优化能级能带结构,同时探究催化剂不同晶面上光生载流子的分离行为、氧化还原能力以及催化活性的选择性等独特性质,深入结合理论模拟计算,研究不同形貌的催化剂的裸露晶面上光生载流子的行为和表面/界面微观反应机制。为了深入研究太阳能-化学能转化过程中的关键科学问题,构筑一种新型的具有特定结构和功能的MnxV2O5+x(x=1、2或3)基可见光催化材料,在不添加任何贵金属元素的情况下,Mn3V2O8修饰的V2O5/g-C3N4异质结构在可见光照射下表现出明显的光催化活性,比V2O5/g-C3N4异质结构高出近3倍。由于V2O5和g-C3N4之间的Z-方案路径促进了载流子的分离,因此具有优异的可见光催化活性。
淮阴工学院 2021-05-11
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