细胞互作的原位捕获技术
不同细胞之间的相互作用和信息传递在包括 免疫 响应 、 器官 发育、神经传导 在内的众多生命活动中都扮演 着 关键角色 。目前, 研究 细胞互作 的方法 大 都 需要 已知参与 的 细胞类型 ,难以在复杂的活体环境下发现或研究未知的细胞 间 相互作用 。 为了解决这一难题,陈鹏课题组 借助“定向进化”技术和“ 邻近标记 ”策略,实现了 细胞 之间 动态相互作用的 原位捕获。这一被命名为 EXCELL ( Enzyme- m ediated proximal cell labeling ) 的技术,通过将 作者 定向进化得到的分选酶( mg SrtA ) 展示在 待研究的 细胞表面, 能够对与其 相互作用 的 细胞 进行原位捕获与鉴定 ,为研究细胞 - 细胞相 互作用提供了有力的工具 。 源自 金黄色葡萄球菌 的 分选酶 Sortas e A ( SrtA ) 能够 催化 分选肽 ( LPETG ) 和寡聚甘氨酸 的 共价连接。近期有文献报道将 SrtA 用于监测小鼠体内特定受体 - 配体介导的免疫 细胞互作 过程 1 。但是该方法 需要将 SrtA 与 寡聚甘氨酸分别融合在相互作用 的 配体和受体 细胞 上, 因此需要预知 相互作用的 细胞 类型,并对两类细胞 同时进行 基因 改造 ,因此无法捕捉未知的细胞间相互作用 。本研究突破了这一瓶颈, 建立了 对 SrtA 进行定向进化的高通量 荧光 筛选 平台,并成功 获得 了 对单一甘氨酸进行标记的 高活性 SrtA 突变体 - mgSrtA , 能够 实现对 任意 细胞类型的有效标记。
北京大学
2021-04-11