本发明公开一种制备热稳定疫苗的方法，特别涉及一种联合使用基因工程和仿生矿化技术制备热稳定疫苗的方法。本发明提供一种利用基因工程技术在疫苗表面引入具有诱导无机物矿化能力的多肽的方法；(1)构建疫苗的基因克隆；(2)将多肽的核酸序列插入疫苗基因克隆中，得到重组克隆；(3)将重组克隆在细胞或大肠杆菌内表达，得到具有自矿化能力的疫苗。本发明还一种制备钙矿化上述制得的具有自矿化能力的疫苗的方法；(1)向有酸根的疫苗液加入Ca2+离子；(2)将体系进行孵育，获得磷酸钙包被疫苗。本发明通过疫苗矿化，高效地解决了疫苗运输和保存中的热失活现象，显著降低疫苗的财政支出，在新型热稳定疫苗生产中有很好的应用。

类风湿关节炎（RA）是临床最常见的高致残性自身免疫病之一，以慢性破坏性关节病变为主要特征，并涉及全身多个脏器。在我国，RA患病率为0.28%，患病人数500万以上，诊误诊误治率高达42.5%，未经治疗者 3 年致残率高达75%，是导致肢体残疾，尤其是女性致残的首要疾病，严重影响家庭、经济发展以及社会和谐。 目前临床常用的RA治疗药物多为对症治疗，患者需要联合用药、终身服药。这些药物或存在副作用，或存在价格昂贵，患者负担重，给药途径受限以及个体反应差别大等问题。开发更加安全、有效、费用较低的新药是目前临床亟待解决的问题。B细胞在RA发病中发挥重要作用，靶向清除B细胞在RA治疗中取得了重大临床成功，但患者面临感染、疫苗接种无应答等风险。 在此基础上，本团队通过分离并进一步灭活RA致病性B细胞，开创性研发了一种B细胞治疗性疫苗，用于皮下注射治疗RA。结果显示，该B细胞疫苗在关节炎模型小鼠中显示了显著的治疗效果，可有效控制关节炎症状，减轻骨侵蚀及关节破坏。此外，该B细胞疫苗对RA患者外周血单个核细胞也展示了明显的抑炎活性，可以降低炎性细胞因子IFN-γ和IL-17A的分泌。

创制出了一种基于细胞悬浮培养技术的血清 4 型禽腺病毒灭活苗。通过悬浮培养技术，该血清 4 型禽腺病毒效价可达到 109 TCID50/ml，是传统鸡胚培养获得的病毒效价的 100 倍。动物免疫效果表明，免疫后 21 天攻毒，非免疫对照组鸡均全部死亡，观察期内发病鸡多表现精神沉郁、羽毛粗乱、食欲不振，剖检可见心包积液、肝脏病变等相关组织病变；免疫组均为 100%保护，观察期内未见任何异常现象，剖检未见腺病毒相关组织病变。高效价血清 4 型禽腺病毒灭活苗的研制可大大降低疫苗的成本，提供疫苗免疫效果，具

猪圆环病毒2型（PCV2）严重危害世界养猪业的健康发展，PCV2广泛分布于世界各地。迄今，世界范围内只有灭活疫苗可资利用，尚无活疫苗面市。研究团队应用基因工程技术，研制成功嵌合型猪圆环病毒活疫苗（C1-233株），该疫苗病毒的滴度、安全性、免疫效力等关键指标优于国外相应的文献报道（国内外无相应产品面市，无法与其产品对照）。该疫苗的制苗毒株应用自主建立的毒株构建方法制备，制苗毒株由研究团队自行分离鉴定，具有完全的自主知识产权。基于实验室前期研究结果，研制的嵌合型猪圆环病毒活疫苗（C1-233株）免疫效

圆环病毒 2 型（PCV2）严重危害世界养猪业的健康发展， PCV2 广泛分布于世界各地。迄今，世界范围内只有灭活疫苗可资利用，尚无活疫苗面市。研究团队应用基因工程技术，研制成功嵌合型猪圆环病毒活疫苗（C1-233 株），该疫苗病毒的滴度、安全性、免疫效力等关键指标优于国外相应的文献报道（国内外无相应产品面市，无法与其产品对照）。该疫苗的制苗毒株应用自主建立的毒株构建方法制备，制苗毒株由研究团队自行分离鉴定，具有完全的自主知识产权。基于实验室前期研究结果，研制的嵌合型猪圆环病毒活疫苗（C1-233

细菌脂多糖可刺激宿主免疫系统产生免疫反应，可利用这一性质开发既无毒性又能刺激免疫系统的类脂 A 分子疫苗佐剂。近年美国 Corixa 公司已开发出可用于乙肝病毒疫苗和过敏治疗的单磷酸类脂 A（MPL）疫苗佐剂。目前 MPL 生产方法是从沙门氏菌的突变株中提取类脂 A 并加以化学处理。本项目根据类脂 A 分 子的合成机理，通过基因工程技术将 pagL、lpxE 和 pagP 单启动子串联共表达，将大肠杆菌中类脂 A 的结构改造成为 MPL，菌株稳定性好，生产方法简单高效。

类脂 A 是脂多糖分子的疏水基团，大量存在于革兰氏阴性细菌的外膜外层，能通过结合免疫细胞表面的受体 TLR4 来刺激人体免疫系统[50, 51]，因而也是一种很好的免疫系统激活因子。美国 Corexa 公司已经开发出了可用于乙肝病毒疫苗和过敏治疗的疫苗佐剂 MPL。研究表明 MPL 刺激的免疫细胞中 IL-1β 的分泌量 显著降低，使得 MPL 的毒性降低但免疫活性还在。MPL 目前是通过从沙门氏菌的 突变株 Salmonella minnesota RC595 中提取类脂 A，然后用化学方法去除其多余的附加基团而得到。本项目拟利用这些类脂 A 修饰酶，根据类脂 A 分子的合成机理，通过基因工程技术将大肠杆菌中类脂 A 的结构改造成为 MPL，构建能合成 MPL 的大肠杆菌。这种新型的能合成 MPL 的大肠杆菌不仅可以作为宿主菌安全使用于食品和药物的发酵工业生产中，而且可以作为实验室研究中更安全的基因表达载体，最重要的是它可以直接用来生产类脂 A 疫苗佐剂 MPL。

青楷槭是长白山地区常见的乔木品种之一，在《本草纲目》、《本草再新》均被提及，其叶片、树皮及果实等部位，均可作为药材使用，具有清热、解毒、抗炎等多重疗效。此外，青楷槭的叶片亦常被用于泡茶或烹饪汤品，有助于缓解上呼吸道相关症状。人参被誉为“天然的能量补充剂”，在提升体力、缓解疲劳方面有显著的效果。现代研究表明，人参能提高体内的ATP（细胞能量来源）水平，改善微循环，从而有效抗疲劳。 青楷槭的抗氧化作用与人参的抗疲劳、增强体能的作用相结合，能够更好地抵御衰老和疲劳的双重挑战。青楷槭与人参的组合具有较好的互补作用。青楷槭的抗氧化、降血糖、调节内分泌等作用与人参的补气、抗疲劳、增强免疫力等特点相结合，能够在提升免疫力、抗衰老、缓解疲劳、调节血糖血脂等多个方面产生协同效应。通过科学的配比和加工，青楷槭与人参合用可以为消费者提供一种功能全面、健康有益的饮品。 1.独特的原料组合与健康功能创新：本项目的核心创新在于将人参与青楷槭这两种具有显著保健功效的天然植物成分进行有机结合。人参以其滋补强身、增强免疫力的传统功效著称，而青楷槭则富含丰富的抗氧化物质、维生素C及矿物质，具有较强的抗衰老、抗疲劳等健康功效。通过选择水醇提取法、冷冻干燥等来确保有效成分的高效提取，并保持其生物活性，创新性地将这两种植物的优势特性融合，开发出一种具有复合健康功能的功能性饮料，填补了市场上同类产品在多元化营养需求上的空白此外，开发了新型的成分稳定化技术，有效解决了植物成分在饮料中的保存和长期保鲜问题，确保了产品的品质稳定性与健康功效的长期有效。 2.口感优化与产品差异化创新：在口感方面，本项目通过多次配方调整与风味优化，使得人参和青楷槭的独特植物风味得到平衡，并加入天然水果香料，改善传统中草药饮料的“草本味”，使饮料口感更加顺滑、清新、适合现代消费者的接受口味。这种口感创新不仅提高了消费者的饮用体验，也突破了传统草本饮料的单一风味模式，为市场带来了差异化竞争优势。 根据市场研究，健康饮品领域，消费者越来越倾向于选择具有增强免疫、抗氧化、抗衰老、降血糖等多重功能的饮品。人参作为传统滋补佳品，已在市场上占据了一定份额，凭借其强身健体、补气养血的功效，广受消费者喜爱。而青楷槭，作为富含多酚类、黄酮类等抗氧化成分的植物，其抗衰老、抗疲劳、降血脂等效果逐渐得到消费者的认可。两者结合的功能性饮料，能够满足市场对天然健康饮品的需求，成为新兴的市场亮点。随着生活方式的变化，越来越多的职场人士、学生群体等年轻人开始关注抗疲劳、抗压、促进睡眠的饮品，这为人参青楷槭饮料的市场拓展提供了机会。 目前，市场上的功能性饮料竞争激烈，主要以一些大型饮料品牌为主导，如红牛、华润怡宝等企业推出的健康功能饮料占据了较大的市场份额。此外，还有一些植物性饮品品牌如植物萃取饮料、草本茶等逐渐获得关注，满足消费者对天然、低糖、无添加的偏好。然而，这些产品多集中在单一功能或传统草本成分上，缺乏多种植物成分的创新结合。因此，人参和青楷槭的结合，作为一种具有多重健康功效的饮品，有望在现有市场中开辟出新的细分市场，填补部分空白。

一、 项目简介1、高度可调节公路防撞护栏与旧护栏改造技术：我国2006年颁布实施了新的《公路交通安全设施设计规范》，其中高速公路路侧防撞护栏防撞能量由93kJ提高到160kJ。同时，由于道路频繁养护罩面，导致路面增高而使护栏相对高度降低，严重影响护栏防撞能力，经调查护栏高度降低10cm时，事故严重程度增加2.3倍。针对上述问题本项目开发了一种高度可调节公路防撞护栏，并提出了旧护栏防撞能力提升改造新技术。2、充气式便携路锥：汽车上所携带的交通警示标志一般为三角架型，其矮小和醒目性不够强而警示效果不显著，而且稳定性较差，当大车或高速车辆从标志旁通过时其易于倾倒。开发了一种充气式便携路锥，该采用重型底座上连接锥形气囊的结构，应用 “不倒翁”原理，增强了路锥的稳定性，提高了路锥的便携性，使其方便存放和运输，使用时不易倾倒。3、车辆-护栏碰撞力学仿真模拟系统：通过实际拆车建立了适用于护栏碰撞实验的标准大客车和小客车弹性体车模型，该模型按照真实车辆行驶系统建立，并保证车辆的行驶轨迹正常，并在对护栏板进行拆分及力学实验基础上，建立了“汽车－护栏”碰撞系统，从而节约了护栏-车辆实体碰撞实验次数和费用。二、 项目技术成熟程度目前上市两项成果已通过国家CMA和CNAS检测认证，在部分高速公路省适用效果良好。三、 技术指标（包括鉴定、知识产权专利、获奖等情况）上述成果河北省交通运输厅组织专家鉴定，成果达到国际先进水平，并获河北省科技进步三等奖。申请国家实用新型专利3项。四、 市场前景（应用领域、市场分析等）2005年底（《公路交通安全设施设计规范》实施前）我国高速公路里程4.1万公里，河北省2329公里，这些高速公路都进行过1-3次罩面，护栏高度已降低了4-12cm，都面临防撞能力严重不足问题，因此2005年前所建高速公路的路侧安全问题亟待解决五、 规模与投资需求（资金需求、场地规模、人员等需求）具有上述产品的常规交通安全设施生产能力的生产厂商均可加工生产上述产品。六、 效益分析 该项目开发的高度可调节护栏是针对我国路面早期病害严重，加铺罩面频繁导致护栏相对高度降低这一现实问题展开的，研究目的一是通过护栏高度调节，实时维持护栏高度在最佳值，从而提高路侧安全保障性能，降低路侧事故危害；二是降低护栏高度不足时的改造费用，节约改造成本、降低施工难度和对交通的影响。因此社会经济效益巨大，具有广阔的应用前景。七、 合作方式技术转让或合作生产。八、 项目具体联系人及联系方式（包括电子邮箱）崔洪军，022-60435953，cuihj1974@126.com九、高清成果图片2-3张

紫檀茋可有效防治肾小球疾病的活性作用，拟依托上述工作基础和本项目的实施运行，以新药产品研发为导向，力争研制开发以紫檀茋为主要活性成分的肾小球疾病防治新型药物，本项目具备良好的可行性。项目申报团队中药干预防治肾小球疾病，特别针对紫檀茋的药理活性开展了多项深入研究。在国际上率先发现和报道了紫檀茋对肾脏疾病，特别是肾小球损害具有确切的改善治疗作用；2014年获得国家专利授权保护（专利号ZL201210359684.5）