研发阶段/n这是免疫性状相关基因专利，通过本专利的应用，在猪育种中可以提高猪的免疫力和抗病力，节约医药成本，提高经济效益。

本发明公开了一种端粒酶启动基因表达方法(Telomerase?Activating gene Expression，Tage)及其应用，该表达方法基于端粒酶可结合并延长DNA分子末端的端粒酶识别序列，合成新的端粒重复序列的特性，将端粒酶特有的生物学功能与人工转录因子调控细胞基因表达技术相结合，发展了Tage新方法。Tage技术在细胞中可以有效发生，人工转录因子可激活效应基因在端粒酶阳性细胞中的表达，效应基因的表达产物可有效杀灭肿瘤细胞，本发明证明Tage技术可用于杀灭肿瘤细胞，而对无端粒酶活性的细胞

01.成果简介 CRISPR/Cas9是细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统。其工作原理是crRNA通过碱基配对与tracrRNA结合形成tracrRNA/crRNA复合物，此复合物引导核酸酶cas9蛋白在与crRNA配对的序列靶位点剪切双链DNA。经过研究，通过人工设计tracrRNA/crRNA，改造形成具有引导作用的sgRNA，可以引导Cas9蛋白在多种细胞的特定基因组位点上进行切割、修饰，并最终实现基因突变、插入或缺失。因此，CRISPR/Cas9系统已经被广泛应用于基因编辑技术领域。 近年来，CRISPR/Cas9基因编辑系统在真核生物和原核生物中得到了广泛的应用。在大肠杆菌等革兰氏阴性菌中，用一个载体表达cas9基因，同时由于革兰氏阴性菌重组效率低，需要在这个载体上表达λ-RED重组酶；在另一个载体中表达sgRNA和用于同源重组的同源臂序列。两个载体都转入大肠杆菌中时，sgRNA介导Cas9蛋白切割基因组上特定序列，形成双链断裂，刺激同源重组的发生，从而实现基因编辑。 本项成果构建了适用于盐单胞菌的基于CRISPR/Cas9的基因编辑系统。该系统由两个载体组成：第一个载体表达Cas9基因，且不需要表达λ-RED重组酶，实际操作中不再需要诱导λ-RED重组酶的表达，简化了步骤流程；第二个载体表达sgRNA，并含有用于同源重组的同源臂序列。从而实现了基因编辑。本项成果的技术优势包括： （1）基因编辑时间由原有的20余天缩短到7-8天； （2）N个基因编辑时间由原有的N个月缩短到3+5N天； （3）无需表达λ-RED重组酶。                        图1 盐单胞菌TD01进行基因编辑的流程示意图02.应用前景 本项成果可作为CRISPR/Cas9基因编辑系统的载体，广泛应用于基因编辑领域。03.知识产权 本项成果已申请1项发明专利。04.团队介绍 本项目为多团队合作项目，其中一个团队的负责人为清华大学教授，博士生导师，长江学者特聘教授，国家杰出青年基金获得者。主要研究方向为合成生物学、微生物代谢工程、生物材料、工业生物技术。已发表国内外高水平学术论文数十篇，申请专利70余项。05.合作方式 投融资。06.联系方式邮箱：zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

1. 痛点问题 红球菌是具有高抗逆性（耐有机溶剂、耐高温、耐酸碱）的特殊放线菌，日本30年前首先使用红球菌高效催化丙烯腈水合生产丙烯酰胺——其聚合产物广泛用于石油开采、水处理、土壤改良剂等领域——迄今为止仍是工业生物技术领域最成功的案例之一。开发红球菌基因编辑方法，一方面可以实现红球菌细胞自身性能的按需调控（如敲除副产物基因），解决丙烯酰胺、丙烯酸铵等酰胺、羧酸类大宗/精细化学品生产中的高成本和高排放问题，另一方面有望以红球菌细胞为普适性宿主，高表达各种外源功能酶，从而实现重组红球菌全细胞催化技术的普遍应用，尤其是解决手性医药中间体现有制备工艺中路线长、工艺复杂、原子经济性差、环境污染严重等各种主要问题。但是，作为一种革兰氏阳性放线菌，红色红球菌存在基因组中GC含量高、基因转化率低、非法重组严重等问题，基因组改造困难。目前红色红球菌基因组改造主要依赖于自杀质粒介导的同源重组，但自杀质粒转化效率和单交换成功率很低，正确编辑率更低。因此，迫切需要开发高效的红球菌基因组编辑工具。 2. 解决方案 本技术核心成果是一种基于CRISPR（成簇规律间隔短回文序列）-Cas9（DNA剪切蛋白）技术的红色红球菌基因组高效编辑方法。该技术通过红色红球菌特有启动子及质粒元件，首先实现了Cas9蛋白在红色红球菌中的表达及切割功能；其次成功规避了红球菌的限制修饰系统，将红色红球菌基因转化效率提高了80多倍；接下来，又通过红球菌重组酶的引入，显著提高了外源基因在红色红球菌中的同源重组效率，最终率先成功建立红色红球菌的CRISPR/Cas9基因编辑系统，不仅可以实现基因组上目标基因的敲除、替换和改造，也可实现多个基因的同时敲除以及无痕叠加敲除，为红球菌全细胞催化平台技术开发及其在化学品绿色先进制造中的应用奠定了坚实基础。 合作需求 开展合作开发、技术许可等，寻求有志于生物制药、生物合成、石油开采、日化洗涤等不同应用领域进行红球菌全细胞催化法生产目标产品的企业合作，尤其是在上述不同领域具有生产和销售优势或经验的企业。

产品详细介绍2路高清采集卡/高清编码卡/ H.264编码卡Kylines Duo  Kylines Duo是2路音视频高清硬编码采集卡。其中1路SDI，1路DVI（HDMI、色差分量、VGA四种接口复用），H.264采集压缩，码流可调，板卡自带硬件压缩编码引擎，几乎不占用PC机CPU资源，使开发的产品稳定性更高，大大提升了整个系统的稳定性，使多路高清采集，编码，传输等轻松实现。同时，为了方便很多需要多路高清视频软压采集卡的客户，Kylines Duo也支持软压，这样方便了系统集成用户，根据项目的需求，增加了集成的灵活性。产品特性：同时采集两路YUY2原始1080P@60fps的高清采集，同时支持此两路高清1080P的H.264硬件编码，另支持两路576P D1的H.264硬件编码压缩。(1).两路高清分别为1路1080P@60fps高清SDI，1路DVI（HDMI、色差分量、VGA四种接口复用）接口的最高支持到1920X1080@60fps， VGA信号最高支持到2048X1536。(2).采集卡与DirectShow兼容；微软AVStream标准驱动，可支持Windows上的多媒体视频软件或流媒体软件。(3).VGA信号采集；从640×480到2048×1536；而且可以采集非常规分辨率。(4).硬件色彩转换，输出RGB24，RGB32，YUYV，UYVY，I420色彩格式。(5).高清输入支持色彩调节功能，可调节画面的对比度、亮度、色彩饱和度、色调、Gamma；并可单独调节R，G，B三色的亮度、对比度。(6).H.264编码器支持从QCIF到1080p60之间各种分辨率。(7).H.264编码可控制参数：分辨率、最大码率、GOP、实时码率控制、强制生成关键帧等。(8).音频编码支持AAC和LPCM。(9).可以根据客户要求定制开发。应用领域： 1．教育课件录制、多媒体录播录像、非线性编辑、视频会议，远程教育培训; 2．大屏幕拼接、电视墙行业、虚拟演播室、虚拟现实、工控、 机等设备; 3．安检 X 光机、雷达图像信号、VDR纪录仪; 4．医疗 X 光机、CT机、胃肠机等; 5．高清流媒体，网络视频直播，IPTV等  技术参数：Parameters Model Kylines DuoVideo Input Channels  2 Input Format  SD-SDI / HD-SDI / 3G-SDI X1VGA/HDMI/DVI-A/DVI-D X1 SDI Standards  SMPTE 259M / 292M / 344M / 424M (depends on the performance of the inputs device)  Resolution  Up to 1920 x 1080p (Full HD 1080p)  Compression  H.264 / MJPEG / RAW  Max. Frame Rate  120 fps at Full HD 1080p (up to 60fps per channel)  Connectors  SDI：BNC×1 DVI：DVI-I×1（VGA Or HDMI：DVI Converter）Audio Input Channels  2  Compression  ADPCM / MP2/MP3/G.711  Sampling Rate  Up to 16-bit, 44KHz, stereo  Connectors  BNC (shared with video inputs) Video Output HDMI Out 1,resolution up to 1080P,frame rate up to 60fpsPeripherals& Accessories Giga Lan Port  10/100/1000 Mbps LAN port x1; RJ-45×1 connector  Data Bus  PCI Express Gen2.0 x4 Physical Characteristics Power Consumption  < 30W  Operating Temperature  0 ~ 60° C (32 ~ 140° F)  Dimensions  175mm * 109mmSoftware Supported OS  Windows XP / Vista / Windows7/8Linux  SDK  User’s Manual Programming Guide VC++ Sample Codes  Demo Program Video Capturing and H.264 Encoding at PCIe Device Mode DirectX Required  Version 9 or above 

产品详细介绍4路高清/标清H.264编码器/4路HDMI高清编码器--Kylines LMT8400HD                   IPTV行业又添利器，Kylines LMT8400HD 4路高清编码器,采用最为先进的H.264/AVC视频压缩算法和MPEG4 AAC音频压缩算法，在低网络带宽下也具备优异的视频表现和音频还原性。在1Mbps视频码率和30kbps的音频码率下也能实现高清视频在互联网络上的完美呈现。为适应各种复杂的网络音视频协议Kylines LMT8400HD提供了多种视频格式和流媒体协议，例如RTMP, RTSP/RTP, MMS, UDP，HLS。用户可以通过网络流行的Flash播放器，VLC播放器，Windows Media Player等进行直播视频观看。可广泛用于网络视频直播，手机视频直播，远程会议，酒店VOD，校园广播，医院专家会诊等众多应用领域。Kylines LMT8400HD内部集成支持多协议并发服务器，服务器可同时支持UDP、RTSP、HTTP、RTMP、HLS等主被动客户端及服务器端的接入。在多协议并发工作的同时，每种协议还支持多端推送或被动接入。主要特性 H.264/AVC High Profile Level 4.1、H.264/AVC High Profile Level 4.0及H.264/AVC High Profile Level 3.0编码，先进的视频预处理算法 MBAFF（宏块自适应帧场编码） 业界首款三重B帧预测，在优秀图像质量的情况下最大程度降低带宽 先进的VXT2二阶运动预测技术、运动预测精确、提高图像细节完整性 自适应GOP结构，自动探测图像内容，自适应插入I帧 自适应加权预测技术，提高敏感区域图像质量 音频编码支持AAC ，MPEG1 Audio Layer 2 HDMI，HD/SD-SDI数字视频输入 HDMI，HD/SD-SDI数字音频输入 CVBS模拟符合视频输入 非平衡左右声道输入 PAL、NTSC标清视频格式 高清720P、1080I、1080P视频格式 支持本地视频预览 支持TS OVER UDP输出,支持32个客户端 支持FLV OVER RTMP输出，支持32个目标服务器 支持ASF OVER HTTP输出，支持32个客户端 支持向Adobe FMS发布实时直播流，支持32个目标服务器 支持向microsoft WMS发布时时直播流 支持iOS系统终端设备接入，支持32个客户端 液晶&按键操作 嵌入式WEB网络管理 低功耗技术指标输入 视频 HD/SD-SDI，BNC接口(X4)（选配） HDMI (HDCP Support) (X4) CVBS,BNC接口(X4) 音频 HD/SD-SDI内嵌音频(X4) （选配） HDMI内嵌音频(X4) 非平衡左右声道输入，BNC接口(X4)视频 分辨率 1920×1080P 1920×1080i 1280×720P 720×480P/i (NTSC) 720×576P/i(PAL) 480x320P/i 320x240P/i 编码 H.264/AVC High Profile Level 4.1(高清)H.264/AVC High Profile Level 4.0(高清)H.264/AVC High Profile Level 3.0(标清)H.264/AVC Main Profile Level 3.0(标清) 压缩率 1Mbps(720P60) 码率 0.3Mbps~30Mbps 码率控制 CBR/VBR GOP类型 IP IBP IBBP IBBBP IBBBBP 帧率 15Hz – 60Hz音频 编码 AAC-LC、MPEG-1 Layer 2 采样率 48KHz 采样精度 24 bit 码率 30Kb/s~384Kb/s以太网输出 1路RJ45网络输出操作 液晶+按键操作，网络管理(WEB)，英文操作界面 可通过本地网络进行在线软件升级机电 环境 0~45℃(工作)，-20~80℃(存储) 尺寸(宽x长x高) 1U机箱 (482mm×440mm×44.5mm) 重量 5Kg 电源 AC 110V±10%，50/60Hz或AC 220V±10%，50/60Hz 功耗 38W

肝癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）是全球第五大常见的消化道恶性肿瘤，也是全球第三大致死性癌症。我国肝癌病发率位居全球首位，肝癌已成为严重威胁我国人民健康和生命的疾病。由于肝癌的早期诊断缺乏可靠的生物标志物，肝癌患者通常在肝癌晚期才被诊断，其5年生存率仅为15%。目前肝癌诊断主要依赖于影像学检查或者血液活检中的甲胎蛋白（AFP）标志物等手段。但这些传统方法对于癌变早期存在敏感性低、特异性低等局限性，例如，血液活检中的甲胎蛋白特异性差，且往往到癌症晚期才能检测到其含量升高，可能延误最佳的治疗时机。因此亟需找到一种可用于肝癌诊断及预后的可靠的新型液体活检标志物。 液体活检为一门新型的检测技术，越来越受到关注。目前可以作为无创检测的生物标志物大多数是蛋白质分子和DNA分子，但这些标志物在灵敏度、误诊率和经济成本高等方面的缺陷导致它们很难被普及。RNA分子在细胞中拥有多个拷贝并且存在多种转录调控形态，可以更加准确地反映细胞状态和癌症动态发展过程，而且其检测成本也很低。 过去体液中的RNA标志物研究主要集中在miRNA等小RNA的研究，相对于细胞中大量的长RNA，miRNA的数量要少一个到两个数量级，因此提供的信息也有限。本项目另辟蹊径，通过对大量肝癌患者（HCC）、慢性乙型肝炎患者(CHB)和健康个体(HD)进行血浆中非编码RNA表达谱的高通量测序检测和分析，发现了一种非编码RNA，srpRNA (RN7SL1)，的功能结构域可以稳定存在于血液中，并在区分肝癌患者和阴性对照组时具有良好的敏感度和特异性（约90%）。并且，通过在独立验证集上的实时荧光定量检验（RT-qPCR），该srpRNA (RN7SL1)的功能结构域被证明在 肝癌的诊断及预后方面都具有可靠的临床表现。

项目成果/简介:肝癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）是全球第五大常见的消化道恶性肿瘤，也是全球第三大致死性癌症。我国肝癌病发率位居全球首位，肝癌已成为严重威胁我国人民健康和生命的疾病。由于肝癌的早期诊断缺乏可靠的生物标志物，肝癌患者通常在肝癌晚期才被诊断，其5年生存率仅为15%。目前肝癌诊断主要依赖于影像学检查或者血液活检中的甲胎蛋白（AFP）标志物等手段。但这些传统方法对

本发明提供了花生维生素E合成相关基因AhPK及其在提高植物维生素E含量和耐盐性中的应用，将该AhPK基因在花生中超量表达后，得到生育酚含量和活性最高的α生育酚含量显著提高的转基因植株。实验证明，将本发明的AhPK基因超量表达可显著提高花生叶片的维生素E含量，且可明显增强转基因花生种子的耐盐性。本发明的蛋白及其编码基因对于植物维生素E合成机制的研究，以及提高植物的维生素E含量、活性和植株的抗逆性具有重要的理论及实际意义，应用前景广阔。

模具是现代工业中不可缺少的关键装备之一，市场潜力巨大。为避免模具过早失效，模具型腔及相对运动件表面必须具有高硬度及自润性，以达到耐磨、减磨、耐蚀及抗疲劳的作用。因此,表面强化技术是充分发挥模具潜力、提高其使用寿命的一条行之有效的途径，它是国内外模具工业与技术的主要发展方向之一。为此,东南大学研究了镀液配方中主盐、还原剂、络合剂、稳定剂、分散剂等对模具表面镀层的硬度、耐磨性、结合力、表面光洁度、耐腐蚀性等的影响规律，优化的纳米改性层硬度为HV900以上，纳米改性层与模具基体结合力大于150MPa，处理后表面光洁度不低于处理前；处理前后表面厚度变化小于30mm；纳米改性后塑料成型模次提高30%以上。 /line此外，采用先进的反应磁控溅射离子镀方法，研究开发了Ti－Al－C－N系纳米复合硬质涂层，系统研究了碳含量，铝含量，氮流量，沉积温度和偏压对涂层微观结构和性能的影响。研究表明涂层的性能与微观纳米结构密切相关，通过工艺参数优化后的纳米复合TiAlCN涂层具有HV2400的显微硬度，同时具有0.2的低摩擦系数，并且具有良好的膜基结合性能和抗氧化性能。