"磷脂酶 D （PLD）是一类具有水解作用和磷酰基转移作用的酶, 在磷脂改性方面发挥着重要作用。它可以将大量磷脂酰胆碱(PC) 催化合成为自然界稀有的磷脂质，如磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PS)和磷脂酰甘油(PG)等，合成的磷脂质在医药和食品工业具有很大的应用前景。但由于来源不足和价格高，PLD的工业应用一直受到限制。本项目通过基因工程和微生物发酵技术，解决了PLD工业化应用中难表达和表达量不足的难题，利用重组大肠杆菌发酵实现了PLD的高水平表达，其酶活为106 U•L-1，产量为748 mg•L-1，分别比目前报道的最高水平提高了100倍和20倍；同时，本项目还建立了一种简单有效提取重组PLD的方法，可望大大降低PLD的生产成本。本技术先进，应用前景看好，如按106 U•L-1的发酵水平生产，成本约100元人民币/1000 U，目前市场售价在3000-6000元/1000 U，利润空间很大。 "

一、成果简介 本项目为国家高技术研究发展计划（863计划）资助项目成果。本研究首次采用了分段冷却工艺对再制干酪 进行冷却，与传统快速冷却和慢速冷却工艺相比，这种冷却方式使向再制干酪中添加活性益生菌变成了现实，使益生菌在再制干酪中能够保持较高的活菌数量和活性。为使益生菌在产品中的分布均匀，添加时进行了搅拌， 研究表明，这种搅动作用对产品的品质没有破坏作用。同时，这种向再制干酪中添加活性

一、成果简介 该课题受北京市自然科学基金项目“植物乳杆菌素对肉源李斯特氏病原菌作用机理研究”的资助，鉴于化学防腐剂在食品防腐应用中的不安全性，重点开展了新型生物防腐剂乳酸菌细菌素产生菌株的筛选，活性细菌素的分离纯化，细菌素及其产生菌株的应用研究。二、技术指标 从传统宣威火腿中分离筛选出一株高产

项目研究背景 ：抗菌肽是在某些诱导条件下，由动植物体内防御系统 产生的对抗外源性病原体致病作用的防御性阳离子多肽类抗菌活性物质。 抗菌肽具有特殊的抗菌机理和广谱高效的抗菌活性。天然抗菌肽获取困 难，主要是采用基因融合的方式进行外源表达。利用生物技术表达、改造 抗菌肽，提高抗菌肽抗菌活性，从而开发出对人体和环境安全无毒的食品 防腐剂和农药产品，还可开发出一类新的抗生素产品。 技术性能 ：本研究在国内首次报道利用大肠杆菌

本发明所构建的融合蛋白 EAMM 能在大肠杆菌中稳定大量表 达，经纯化得到纯度较高的蛋白;构建的亚单位疫苗免疫动物能产生 针对结核杆菌特定抗原(ESAT-6、Ag85B、Mtb8.4 和 PPD)的特异 性的细胞免疫和体液免疫应答，具有较强的免疫原性。EAMM 亚单 位疫苗加强免疫后的结核菌载量明显少于 PBS 组和仅 BCG 免疫组， 表明清除结核分枝杆菌的能力较强。从组织切片 HE 染色

磷脂酶D（PLD,EC 3.1.4.4）是一类广泛存在于各种生物体的酶，具有水解作用和磷酰基转移作用（见图1）。作为一种酶制剂，PLD的转磷脂酰活性尤为重要，被用于制备具有生物活性的稀有磷脂。其中，以大豆磷脂酰胆碱（PC）为底物，PLD酶法制备磷脂酰丝氨酸（PS），受到广泛关注。PS作为脑健康营养补充剂，相继被美国FDA、日本HBM和中国国家卫生计生委所认证，列为新资源食品。相较于提取自牛脑和植物的PS，生物酶法制备的PS，避免了食品安全和植物源含量低的问题。进一步，一些新的结构和功能磷脂，通过PLD转磷脂酰反应被合成出来，例如，磷脂酰鲨肝醇、磷脂酰葡萄糖、心磷脂类似物、磷脂酰酪醇、磷脂酰萜烯和磷脂酰丝氨醇，它们中一些具有抗癌和抗氧化活性。 直到现在，受限于磷脂酶D来源不足和价格高（链霉菌属PLD，≥150 units/mg，6516.9¥/1000 U，Sigma公司），其工业上的广泛应用受到限制。例如，文献报道的PLD最高产量在104-105U·L-1，而制备转化得到每公斤PS，需要2.6×106U的PLD。这一障碍的主要原因是高水平表达的PLD对宿主的严重细胞毒性，导致细胞死亡。 历经5年时间，从上游到下游整体设计，我们解决了毒性蛋白（磷脂酶D，PLD）异源表达难的问题（质粒不稳定、蛋白合成时间短、细胞生长抑制和裂解），PLD生产达到目前世界最高水平106U·L-1(748 mg·L-1)（提高20倍）；同时发展一种简单有效提取重组磷脂酶D的方法（无需破碎、无需添加溶菌酶和有机溶剂、室温进行），PLD生产成本有望降低20倍以上。按照实验室规模的一台5 L发酵罐，年产量可以提供3.5×108U的磷脂酶D，满足100 kg的PS转化需求计算（不计算PLD重复利用率），扩大反应器体积至100-1000 L，PLD产量可满足制备2-20吨PS的需求。

本发明所构建的融合蛋白EAMM能在大肠杆菌中稳定大量表达，经纯化得到纯度较高的蛋白；构建的亚单位疫苗免疫动物能产生针对结核杆菌特定抗原（ESAT-6、Ag85B、Mtb8.4和PPD）的特异性的细胞免疫和体液免疫应答，具有较强的免疫原性。

昆山登云科技职业学院是江苏省人民政府批准，由台湾知名人士热忱投资举办的全日制普通高校。学院秉承“诚正、弘毅、奋进、创新”的校训，崇尚“德育为先、能力为重、全面发展”的教育思想，先后荣获“江苏省高等教育综合改革自主试点学校”、“江苏省平安校园”、“中央财政支持实训基地”、“江苏省电子商务人才培训基地”、“苏州市职业教育先进单位”、“江苏省民办高校党建考核优秀单位”、“江苏省示范性高职院校建设单位”、“江苏省“十三五”高等职业教育产教深度融合(汽车工程)实训平台立项建设单位”、“江苏省高水平骨干专业(机电一体化)建设单位”、“全省百佳学生资助工作典型单位”、“江苏省平安校园建设示范高校”等殊荣。 ★独特的区位优势 学院位于全国百强县之首的昆山市，与昆山高新集团实施混合所有制合作办学，占地面积696亩。东接上海，西邻苏州，地处中国经济最发达的长江三角洲核心地带，区位优势明显，交通十分便捷。区域内拥有台资企业4600多家。“苏南国家自主创新示范区”和“昆山深化两岸产业合作试验区”全面实施产业转型升级，人才需求极为旺盛，为学院的可持续发展和学生就业创业提供了得天独厚的条件。 ★合理的专业设置 学院现有教职工330多人，全日制在校生近7000人。根据社会需求和服务地方经济的需要，构建了“以应用学科为主体，多学科协调发展”的专业结构。设有机电工程系、汽车工程系、信息技术系、建筑与艺术系、商务管理系、服务产业系等6个系43个专业，实现了学院专业群与地区产业链的深度对接，形成了多方参与，多层次、多形式办学格局。机电一体化技术专业、酒店管理专业、汽车检测与维修技术等一批省级示范高职院重点专业特色鲜明，社会美誉度较高。 ★优良的教学团队 学院积极实施师资队伍建设工程，不断加大高层次人才引进力度。引入台湾高校、科研机构及知名企业的优秀师资、科研人才，聘用企业工程技术人员兼职任教，创造尊师重教的环境，凝聚广大教师投身教育事业、科学研究和社会服务，提升教学水平、科研能力和人才培养质量。学院现有专兼职教师400余人，其中专任教师227人，“双师型”教师达80%，形成了“师德高尚、业务精湛、专兼结合、校企互通”的教学科研团队。 ★先进的人才培养模式 学院创建独具特色的“工学结合专班、校企双主体育人”人才培养模式，成为台商企业技术骨干的摇篮。先后与300多家企业建立了合作关系,与苹果公司和纬创资通合作实施APPLE+雏鹰计划;与通力电梯、友达光电、立讯精密工业、兰博基尼、亨通集团、皇冠集团、沃尔玛、洽兴包装工业(中国)等70多家知名大型企业集团共建教学实训基地;与昆山高新集团深度合作共建(两岸)科教创新基地，培育战略性新兴产业，培养精英高技能人才，促进教育、科技与产业发展;与东南大学成贤学院合作开展高职与普通本科“3+2”分段培养合作项目，为学生搭建了专本无缝对接的人才培养直通立交桥。每年有数百名学子通过“专转本”、“专接本”、“专升本”等方式进入本科院校继续深造。 ★优秀的合作交流平台 学院融合两岸职业教育先进理念，充分利用台湾教育优势资源，与台湾成功大学、东南大学等高校，台湾中卫发展中心、昆山工研院等科研机构以及两岸众多知名企业，共同构建了两岸产学研协同创新服务平台;与台湾知名高校、两岸台资企业成立“登云两岸产学合作联盟”，辅导产业转型升级，促进“互联网+”等产业技术创新和先进制造业、现代服务业发展，实现了两岸教育链、人才链与产业创新链的衔接，形成了多方参与协同育人的发展格局。利用校内外实训基地，积极开展技术培训、技能鉴定、技能大赛等活动，为大学生和企业职工提供了良好的技术培训服务，实现企业、高校、科研院所等多方共赢，推进两岸教育界、产业界交流合作，共同培养高素质创新人才和技术技能人才。 ★优异的就创业质量 学院建立了一套比较完整的就创业服务体系和就创业指导站,实施学历证书和职业资格证书“双证制”，满足学生学业和就业发展需求，提升创业就业能力。与企业深度合作共建就创业基地126家，不断提高毕业生就业创业竞争力，就业率98%以上，工作半年后岗位晋升率达54%，毕业生对就业工作满意度达96.65%。为国家培养了一大批高技能应用型人才，涌现了一批就业创业能手。 ★和谐的育人环境 学院紧扣时代主旋律，夯实教书育人主阵地，创新文化育人多渠道。做好“人文素养”讲座和非常零距离访谈，做美《登云学工》杂志和《朗读者》栏目，做强专业技能大赛和大学生文化艺术节，大学生的文化生活丰富多彩;心理健康教育和资助育人服务体系完善;大学生活动中心和学生公寓设施齐全，校园环境幽静美丽，学习生活便利温馨。学生的人文素养和职业情操得到全面、系统、多层次发展。 ★宏伟的发展蓝图 围绕国家经济社会发展需要，确立“立足昆山，服务台企，面向江苏、辐射长三角”的办学定位和“公益性、国际化、应用型”的办学方针;坚持“以人为本、学生优先”,“按照教育教学规律和市场经济规律办学”,“服务地方、服务企业、服务发展”的办学理念;实现“优秀办学条件、优秀师资队伍、优秀管理水平、优秀教学质量”的奋斗目标;实施“人才强校”、“政行企校合作”、“特色品牌”、“科研兴校”、“开放式与国际化”的发展战略，把学院建设成为助推区域经济社会发展和“强富美高”新江苏建设，服务国家“一带一路”发展战略，符合教育现代化建设要求特色鲜明的省级示范性高职院，为创建应用型本科学院打下坚实的基础。

它能够自动化地读取心脏CT、MRI影像，重建人体心脏各组织的立体结构, 计算任意部位的体积以及心功能参数，将医生从繁重的人工分析中解放出来，节 省计算时间，提高计算精度，辅助临床医生进行快速精确的诊断。本系统可以读 取存储在医学影像数据管理平台中的DIC0M格式及mha, nii等图像，自动去除 隐私信息，三维重建，并返回关键性的诊断指标和三维打印模型。本系统主要服 务于心脏疾病辅助诊断，医学教育和心脏知识健康教育，心脏医疗器械研发等。动态心脏影像重构云计算系统的核心价值：医生参考重构模型进行手术设计、手术模拟、手术会诊、术中对照等一系列 操作，突破现有影像工作站对于对超声、CT断面、MR断面均存在视角盲区的局 限。解决了临床心脏病诊疗中依靠医生从二维平面推断病员三维心脏结构的难 题。2） 医院无需增加额外设备，无需改变现有治疗流程，通过云服务的方式无 缝融合到现有的诊疗流程。3） 基于300例中国人临床影像经过深度学习而构建，重构精度达到3mm。4）高性能的并行计算集群和专业的3D医用打印机，1.5小时获得计算结果，12 小时实现心脏模型直达。市场及经济效益分析：本项目市场规模巨大。按照《中国心血管病报告2017 （概要）》最新发布, 心血管病死亡占居民疾病死亡构成40%以上，中国心血管病患病率及死亡率仍处 于上升阶段。推算心血管病现患人数2. 9亿，其中脑卒中1300万，冠心病1100 万，肺原性心脏病500万，心力衰竭450万，风湿性心脏病250万，先天性心脏 病200万，高血压2. 7亿。在各类心脏病诊治中，获取心脏的精细结构是必不可 少的一个步骤。由于技术难度受限，本领域目前尚无主导型产品。本项目产生的直接效益：按照全国2232个三级医院的10%来计算，每天10人次, 平均每例利润20元等保守估计，每年产生持续稳定的直接效益为1600万元，尚 不计算本系统对于心脏诊治疗的深度服务。且本系统具有大数据和云计算平台的 核心优势，运营成本低，无需医院添加任何设备。