本技术首先根据鸭胸软骨的化学组成设计了一种用于提取鸭硫 酸软骨素的新型复合蛋白酶的基础配方，并利用复配酶制备鸭硫酸软骨素，其 工艺包括鸭胸软骨骨粉的制备、鸭胸软骨骨粉的酶解提取、蛋白质的沉降、硫 酸软骨素粉末四个步骤。本发明采用了复配酶解法提取鸭胸软骨的硫酸软骨素， 采用新型复合蛋白酶和胰蛋白酶复配，去掉了碱提这一步，在复配酶使用上也 进行了优化，其收率比其它方法提高了 20%左右，产品纯度达到 90%~95%。用复 合酶代替稀碱或浓碱解离软骨能够大大降低对环境的污染，并且可以有效缩短 生产周期、降低生产成本、增加了产品收率、提高产品质量，填补了该领域的 空白。 技术优点或者效益预测:硫酸软骨素(Chondroitinsulfate，CS)是 D-葡萄糖 醛酸和 N-乙酰氨基半乳糖以β-1,4-糖苷键连接而成的重复二糖单位组成的酸 性黏多糖。硫酸软骨素具有抗凝血、抗炎症、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血 脂、防止动脉粥样硬化、调节体内水分、清除自由基和延缓衰老等多种生理功 能，可应用于食品、药品、各种保健品及高档化妆品中。我国是全球硫酸软骨 素产量最大的国家，占全球产量的 80%以上，年平均产量多于 4000 吨；我国硫 酸软骨素主要出口到美国、欧洲、日本等地，其中美国作为我国硫酸软骨素第 一大出口市场，出口份额约占 50%。所以，随着硫酸软骨素生物活性功能不断研 究及其应用领域的不断扩展，硫酸软骨素用途越来越广，具有广阔市场应用前 景。

鸭茅（Orchardgrass ）是世界著名温带多年生牧草，目前被广泛利用于重庆三峡库区和云贵川等地。本 套成果包含鸭茅的规范种植、种子生产、平衡施肥、促进种子发芽技术、混播技术、混合青贮及家畜利用 等，技术体系完整，应用情况良好。 该配套技术成果包含重庆市地方标准2项、著作1部、sci收录论文4篇,5项国家发明专利。已发布的重庆 市地方标准为“鸭茅种植技术规范“（标准发布号DB50/T477-2012）和“鸭茅种子生产技术规程“（标准 发布号DB50/T478-2012 ）,集成三峡库区中高海拔地区以鸭茅为主的人工草地混播技术并申报国 家发明专利（申请专利号：201210164309.5 ） 0获得4项国家发明专利授权:一种促进鸭茅种子发芽的方 法、鸭茅的施肥方法、一种鸭茅的施肥方法、一种提高鸭茅种子发芽率的方法；研发团队还针对鸭茅开展混 合青贮并评估其饲用价值，开发岀针对山羊和绵羊的饲料配方，获得较好的家畜生产效果。 该成果在三峡库区及贵州省等地得到较好推广转化。

本发明的目的是提供一种鸭坦布苏病毒基因工程亚单位疫苗，即采用生物技术对鸭坦布苏病毒E蛋白进行抗原表位分析、拼接，获得一种鸭坦布苏病毒新型融合蛋白DE，并以该融合蛋白作为抗原来制备鸭坦布苏病毒基因工程亚单位疫苗。本发明中鸭坦布苏病毒新型融合蛋白DE，其编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:1；其中一种核苷酸序列为SEQ ID NO:2。本发明利用pET28a（+）表达性载体构建了能表达鸭坦布苏病毒新型融合蛋白DE的大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌。将重组表达的蛋白纯化后制备成基因工程亚单位疫苗，可使免疫后鸭群获得免疫保护。

本发明涉及一种利用噬菌体PhiX174的E基因和葡萄球菌核酸酶A基因转化制备鸭疫里默氏菌前菌影疫苗的方法与应用方法。该方案首先将噬菌体PhiX174的E基因和葡萄球菌核酸酶A基因通过柔性连接臂(Gly4Ser)3连接成串联基因，并进一步构建温控表达载体pBV-E-SN。将pBV-E-SN电击转化进入鸭疫里默氏菌原生质体，筛选阳性克隆28℃增菌培养。分离菌体加保护剂后分装、冷冻干燥。本发明所制备的活菌疫苗经饮水免疫，既可以刺激呼吸道和消化道黏膜的局部免疫，也可以激发体液免疫。

成果与项目的背景及主要用途：在以玉米原料生产酒精的过程中，每生产一 吨酒精将产生 10～15 吨的废醪液，废醪液中含有固体酒糟，可溶性蛋白质及多 种氨基酸，BOD 值为 28000～45000mg／L，COD 值为 35000～45000mg/L，直 接排放不仅浪费资源，而且严重污染环境，直接影响到酒精工业的持续发展。对 其最有效的治理办法就是利用其中有用成分，生产 DDGS－玉米酒糟粕可溶性蛋 白饲料，这不仅解决环境污染问题，而且还给企业带来可观的经济效益，可谓变 废为宝，化害为利。 天津大学石油化工开发中心凭借多年来在化学工程领域所积累的丰富经验 和扎实的基础理论研究成果，开发出了国内首创且具有国际领先水平的废醪液综 合治理及 DDGS 生产技术，并成功应用于国内大型发酵酒精生产企业。 技术原理及工艺流程简介：来自酒精精馏装置的废醪液通过离心机进行固液 分离，得到的固相物——湿糟送至干燥机干燥，离心所得的清液一部分去发酵车 间搅料，一部分则利用干燥机产生的二次蒸汽，进行多效蒸发，将蒸发的浓浆混 入湿糟，送入干燥机进行干燥。干燥机得到的干糟即为可溶性蛋白饲料－DDGS 产品。 多效蒸发蒸出的水冷凝后收集送出装置，该冷凝水已满足一般污水处理装置 的要求，通过常规处理达到排放标准。 技术水平及专利与获奖情况：本生产技术为国内首家技术与设备全部国产化 的 DDGS 生产技术，具有如下技术优势：实现了废热蒸汽的完全利用——节约 能源，降低成本；设计独特的蒸发器——保证蒸发器长周期操作而不结疤；可以 214天津大学科技成果选编 选用低造价的旋转管束干燥机——降低投资费用；采用国产卧螺离心机——效果 好，投资省。 技术指标如下： 1、产品符合原轻工部标准 Q/HJ J02005-95 2、经处理后的污水 BOD 值下降为 800～1600mg/L。COD 值下降为 1600～ 3600mg/L，常规处理后可达标排放。 应用前景分析及效益预测：我国目前有大小酒精厂家 200 多家，均有不同程 度的存在废水污染问题。按照国家有关的环保政策，对不能将酒精废醪液进行有 效处理的酒精生产企业将采取强制性措施，限期整改，否则将勒令停产，所以本 技术的市场前景非常广阔。 本项目的环境效益和社会效益显著，采用本技术可使酒精装置排放的污水经 过常规的污水处理方法处理后直接排放，既保护了环境，也解决了我国酒精行业 的可持续发展的问题。 本项目的经济效益亦可观，以年产 18 万吨 DDGS 生产装置为例，年创产值 2.07 亿元，可获利润约 3600 万元。 应用领域：适用于以玉米、小麦、木薯等淀粉质原料发酵法生产酒精的企业。 技术转化条件（包括：原料、设备、厂房面积的要求及投资规模）： 生产规模及产量：根据用户需求确定。 所需厂房面积：根据装置规模确定。 主要设备：离心机、干燥机、蒸发器、泵等。 主要原材料及来源：玉米发酵法生产酒精装置生产的废醪液。 设备投资：根据装置规模确定。 总投资：根据装置规模确定。 合作方式及条件：可提供多种合作方式。 

该成果属于农业生物技术领域。针对畜牧业生产中出现的饲料短缺及利用率低、抗生素滥用、畜禽粪便不合理排放等问题，开展了饲用益生菌的筛选、微生态制剂的研发、果渣发酵饲料菌株筛选及发酵菌剂研发、果渣发酵饲料生产工艺优化、生物活性饲料喂养效果评价等研究，获得了具备产业化的饲用优良益生菌菌株，建立了高密度发酵工艺，可实现活菌数高达1013cfu/g的微生态制剂的生产，可部分或全部替代抗生素；获得了多株果渣发酵菌种及发酵复合菌剂。建立了苹果渣生物活性蛋白饲料两步固态发酵工艺，实现了多菌种协同发酵，使发酵产物富含蛋白质、水溶性氨基酸、益生菌和水解酶等多种活性物质；建立了微生物制剂中试生产线、果渣发酵饲料中试生产线。该成果可应用于生物活性饲料、替代抗生素类生物添加剂和非粮生物饲料，生物发酵饲料可以精确到8-15%添加使用。在不增加喂养成本的基础上，提高肉蛋奶产量及品质，降低成本。全省可形成30万吨优质活性发酵饲料，应用价值大。  

饲料添加剂牛羊乐即磷酸脲，是国内近年来开发的一种新型反刍家畜饲料添加剂。国外从 70年代开始广泛使用，饲喂肉牛产肉量可增加10-15%，奶牛奶量增加12-18%。喂羊增重显著， 还可提高羊毛产量，喂雏鸡可提高成活率，降低饲料消耗，有广阔的应用前景。年产1万吨生 产线，设备投资450万元。 氯化胆碱 (氯化-2-羟乙基三甲胺) ，主要用作饲料添加剂。还可用作塑料及印刷业的抗静 电剂和二元羧酸酯化的水解催化剂及植物生产调节剂等。每公斤饲料添加2～3克氯化胆碱， 蛋鸡每月多产蛋7～10%，肉鸡每月增重100余克，对猪、马、兔、貂等动物和鱼类均能促进生 产、繁殖，提高成活率，降低饲料消耗。本技术开发的用价廉易得、无污染、能反复使用的固 体催化剂，催化反应制取氯化胆碱。工艺简单，无三废，成本低，效益好。年产1万吨规模， 设备投资450万元。 双乙酸钠是当今理想的新型高效防霉保鲜助长剂，具有毒性极小，无残留，高效防霉防 腐、保鲜、增加营养价值等功效，是联合国ＦＡＯ/ＷＨＯ组织推荐使用的食品添加剂，已在 美国、日本、德国、加拿大等发达国家普遍使用。本课题组，经过一年的反复实验，研究开发 出以醋酸与烧碱反应制取双乙酸钠的新工艺。该技术设备简单、原料价廉易得、工艺合理、 操作方便、反应时间短、收率高、成本低、无三废排放。年产5000吨规模，设备投资约1200万 元。

饲料添加剂牛羊乐即磷酸脲，是国内近年来开发的一种新型反刍家畜饲料添加剂。国外从70年代开始广泛使用，饲喂肉牛产肉量可增加10～15%，奶牛奶量增加12～18%。喂羊增重显著，还可提高羊毛产量，喂雏鸡可提高成活率，降低饲料消耗，有广阔的应用前景。年产1000吨规模，设备投资：45万元。氯化胆碱（氯化-2-羟乙基三甲胺），主要用作饲料添加剂。还可用作塑料及印刷业的抗静电剂和二元羧酸酯化的水解催化剂及植物生产调节剂等。每公斤饲料添加2～3克氯化胆碱，蛋鸡每月多产蛋7～10%，肉鸡每月增重100余克，对猪、马、兔、貂等动物和鱼类均能促进生产、繁殖，提高成活率，降低饲料消耗。本课题组开发的用价廉易得、无污染、能反复使用的固体催化剂，催化反应制取氯化胆碱。工艺简单，无三废，成本低，效益好。年产1万吨规模，设备投资450万元。

全球氨基酸市场需求增长势头强劲，年均增长5.6%以上。2017年，全球年产量已达850万吨，总销售额超百亿美元。目前，氨基酸的生产主要有三种方法，包括微生物发酵法、化学合成法和酶法水解法等。其中，微生物发酵法因其产能高、成本低等优势，作为最主要的方法，生产了全球总产量85%以上的氨基酸。为应对不断升级的市场需求，氨基酸发酵企业亟需提高发酵产量和拓展氨基酸品种，而关键在于获得氨基酸高产菌株。现有的氨基酸高产菌株筛选方法如氨基酸类似物筛选法，存在毒性高、阳性率低及种类受限等问题，无法满足筛选需求。因此，开发全新的氨基酸高产菌株筛选方法具有十分重要的科学意义和应用价值。 项目组通过增加序列中稀有密码子的数量来提高蛋白翻译所需氨基酸浓度的“门槛值”，利用必需基因和颜色蛋白编码基因，建立了氨基酸高产菌株的选择和筛选体系，并证明了该方法在大肠杆菌和谷氨酸棒状杆菌中的可行性。本研究为氨基酸高产菌株的筛选提供了新系统，理论上可用于任何一种天然氨基酸高产菌株的筛选，同时也为氨基酸高产机制的发现提供了新思路，可用于氨基酸发酵生产中优良菌株的构建，进而推动氨基酸市场的增长，促进氨基酸在饲料、食品、医药等民生领域的应用。 目前，微生物细胞工厂的遗传改造已经基本完成，正在进一步的改造。发酵生产的浓度、产率和速率都达到国际先进水平。进一步的提高正在研究进行中。

全球氨基酸市场需求增长势头强劲，年均增长5.6%以上。2017年，全球年产量已达850万吨，总销售额超百亿美元。目前，氨基酸的生产主要有三种方法，包括微生物发酵法、化学合成法和酶法水解法等。其中，微生物发酵法因其产能高、成本低等优势，作为最主要的方法，生产了全球总产量85%以上的氨基酸。为应对不断升级的市场需求，氨基酸发酵企业亟需提高发酵产量和拓展氨基酸品种，而关键在于获得氨基酸高产菌株。现有的氨基酸高产菌株筛选方法如氨基酸类似物筛选法，存在毒性高、阳性率低及种类受限等问题，无法满足筛选需求。因此，开发全新的氨基酸高产菌株筛选方法具有十分重要的科学意义和应用价值。 项目组通过增加序列中稀有密码子的数量来提高蛋白翻译所需氨基酸浓度的“门槛值”，利用必需基因和颜色蛋白编码基因，建立了氨基酸高产菌株的选择和筛选体系，并证明了该方法在大肠杆菌和谷氨酸棒状杆菌中的可行性。本研究为氨基酸高产菌株的筛选提供了新系统，理论上可用于任何一种天然氨基酸高产菌株的筛选，同时也为氨基酸高产机制的发现提供了新思路，可用于氨基酸发酵生产中优良菌株的构建，进而推动氨基酸市场的增长，促进氨基酸在饲料、食品、医药等民生领域的应用。 目前，微生物细胞工厂的遗传改造已经基本完成，正在进一步的改造。发酵生产的浓度、产率和速率都达到国际先进水平。进一步的提高正在研究进行中。