项目简介 本项目利用具有自主知识产权的乙偶姻（3-羟基-2-丁酮）高产菌株——枯草杆菌，通过有效的发酵控制策略，促进乙偶姻的生成；并利用固定化菌体作为生物催化剂，构建枯草杆菌转化葡萄糖生成乙偶姻的高效生产工艺，有效解除了产物抑制现象；并建立了一套高效的乙偶姻产品提取纯化工艺。该技术是国家科 技支撑项目的成果，乙偶姻生产水平达到目前国际领先水平，已申报两项国家专利。 创新要点 采用的乙偶姻高产菌株具有自主知识产权；建立了简单、高效、低成本的葡萄糖转化生产乙偶姻的生产工艺。 

（一）蜡样芽孢杆菌蜡样芽孢杆菌NJYH63305是团队自行筛选的有益芽孢杆菌，广泛应用于农业、医药、食品保健、饲料等领域。在农业领域，是一种集抑菌、杀虫、促生于一体的环境友好型高效生防制剂，对茶轮斑病菌、黄瓜枯萎病菌、立枯丝核菌、烟草赤星病菌、茶云纹叶枯病菌、小麦全蚀病菌、小麦纹枯病、尖镰孢菌、镰刀菌、终极腐霉菌等植物病害及小菜蛾具有较强抑制作用。在医药领域，可调节人体肠道微生态平衡，适于治疗急慢性痢疾、肠炎、腹泻、婴幼儿腹泻引起的肠功能紊乱等；在食品保健领域，可作为食品添加剂，长期服用能促进营养物质的消化吸收，减少肠道疾病的发生，提高免疫能力、增强抗病能力。 1、蜡样芽孢杆菌国内外研究进展目前，国内外蜡状芽孢杆菌研究大多处于实验室内研究阶段，其商品化并应用于农业防治的实例较少。国内市场上蜡样芽孢杆菌农用制剂大部分为复配试剂，同时其大规模培养过程中也存在不少问题，如发酵放大过程信息采集困难、制剂有效期不长、产品货架期短等，这些问题的深入研究对解决蜡样芽孢杆菌高密度培养瓶颈、降低蜡样芽孢杆菌生产成本、促进细胞大规模培养领域重大突破具有重要意义。2、本课题组技术优势（1）团队以项目为纽带，建立了蜡样芽孢杆菌在线监控的高密度培养与多阶段发酵集成技术，在1000L发酵罐上蜡样芽孢杆菌活菌数高达800亿个/g, 比初始培养提高了230%，达国际领先水平；（2）筛选的芽孢保护剂，可提高蜡样芽孢杆菌活性，延长半衰期40％以上；（3）协同江苏省农科院及南京农业技术推广站进行绿色防控技术推广，于江苏浦口林大蔬菜基地、江宁区湖熟街道设施蔬菜基地、溧水傅家边茶厂等地建立2800亩示范区，重点试验核心区460亩。推广示范区内，蜡样芽孢杆菌对水稻纹枯病、灰霉病、晚疫病等真菌病害抑制率达51.8％～85.9％，与苏云金芽孢杆菌（Bt）进行增效试验，小菜蛾杀灭率提高29%，降低化学农药使用量50％以上，农药残留量低于国家无公害农产品标准；（4）目前已在国内外重要期刊发表学术论文10余篇，出版专著《高效有益微生态制剂开发与利用——蜡样芽孢杆菌》，申请国家发明专利4项，授权3项，其中3项（ZL200910028025.1、ZL201010579133.0、ZL200910028320.7）在南京新百药业有限公司成功实现转化。（二）凝结芽孢杆菌团队自行筛选获得一株益生凝结芽胞杆菌NJYHHWG 877005，除具有和乳酸菌及双歧杆菌同样的保健功效外，还具有耐酸、耐热、耐盐、容易培养和保存的特点。凝结芽孢杆菌为兼性厌氧菌，进入肠道后会消耗游离氧，有利于厌氧微生物乳酸菌和双歧杆菌的生长，多用于调节肠道内微生态菌群平衡，团队自主知识产权的凝结芽胞杆菌NJYHHWG 877005对甜瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、西瓜炭疽病菌等有很强的防治效果，可进行新型高效生物农药的开发。

利用结构生物学和生物信息学手段设计融合蛋白的构建方式，通过生物制备获得融合蛋白，结合生物反应器工程技术和生物过程智能控制技术，建立大规模制备融合蛋白的工艺，实现长效药物蛋白的生产和临床应用。其中长效多肽/蛋白类药物的发酵水平达 1g/L,纯化得率达 20%,体内半衰期较第一代基因工程药物提高 30 倍以上。 

rhscIL12是利用基因工程技术研制成功的一种细胞因子，具有与天然IL12相同的生物学性状。天然IL12由两条肽链1：1形成组配时才有生物活性，否则，不仅没有活性，甚至可抑制天然IL12的刺激免疫作用。目前，国内、外新研制的基因工程IL12都是将两条肽链分别表达的，而我们是将其两条链连接为一条肽链，由果蝇细胞表达系统（这是目前世界上最好的表达系统）表达的。因而可保证其组配始终为1：1，生物活性稳定，而且所用的果蝇细胞表达系统具有表达量高、操作性好的优点。

全世界有超过1000万人的眼盲是由角膜病引起，我国大约有500万角膜疾病患者，其中400万可以通过同种异体角膜移植手术重见光明，但每年能进行此项手术的患者仅为3000例，人角膜供体数量远远不能满足需求——新型的角膜替代物。 市场上销售的AlphaCor人工角膜每个7000美金，本课题活性复合角膜替代物的成本为120美金/个，比AlphaCor便宜近60倍。我们开发的角膜替代物研制方法简单易行，容易推广和产业化，经济效益显著。

成果创新点 本研究利用 IgG1 的 Fc 片段与 IFNα-2b 连接构成融合 蛋白 IFN-α/Fc，以提高 IFN-α 的体内半衰期。 利用基因工程技术把甲醇诱导型启动子 AOXI 变换成组 成型 pGAP 启动子，降低了危险系数，简化了蛋白表达过程， 而且通过优化发酵条件（改变 pH 条件、增加表面活性剂） 增加了干扰素蛋白产量。 应用范围 干扰素-α（IFN-α）是一种具有多种功

本研究利用 IgG1 的 Fc 片段与 IFNα-2b 连接构成融合 蛋白 IFN-α/Fc，以提高 IFN-α 的体内半衰期。 利用基因工程技术把甲醇诱导型启动子 AOXI 变换成组成型 pGAP 启动子，降低了危险系数，简化了蛋白表达过程， 而且通过优化发酵条件（改变 pH 条件、增加表面活性剂）增加了干扰素蛋白产量。 

人血清白蛋白（HSA）由肝实质细胞合成，是人血浆中含量最高的蛋白，可作为载体运 输脂肪酸、氨基酸等营养物质，同时能够调节血浆pH和维持血浆渗透压，是动物细胞培养基中的重要组分之一。重组人白蛋白（ARTrHA）是利用基因重组技术从毕赤酵母中表达纯化得到的重组人血清白蛋白，不含有动物源成分，无任何血源性病毒感染风险，与血清来源白蛋白（pHSA）相比具有更高的安全性和稳定性，可用于多种类型的细胞培养，如间充质干细胞（MSC），胚胎干细胞（ESC），诱导多能干细胞（iPSC）和免疫细胞等。     订货信息 产品货号（Product number） ART103S 规格（Specification） 10g，100 g 规格参数 CAS 70024-90-7 MDL MFCD00081418 产品来源（Source of product） 重组毕赤酵母 外观（Appearance） 类白色疏松体或粉末 蛋白质含量（Protein content） 95.0-110.0% 纯度（Purity） ≥ 99.0% ( USP-NF2023) HCP ≤ 500 ng/g (ELISA) 分子量（Molecular weight） 66.5±6.7 kDa pH 6.4 - 7.4 内毒素（Endotoxin） ≤ 0.5 EU/mg   使用方法 复溶：建议使用无菌 PBS 溶液溶解 ARTrHA 干粉至 200 mg/ml，再用其他溶剂进行进一步稀释并分装。无菌溶液在 4℃可保存 6-12 个月。开启后，请尽快使用，避免污染。 运输和保存方法 冰袋运输。2-8℃，避光防潮密闭干燥，有效期 24 个月。 应用领域 可用于动物细胞培养、血浆基质对照、体外诊断等。 注意事项 本产品仅用于科研、实验室和生产使用，非临床治疗使用，不得用于动物及人体。  

本发明涉及一株粪产碱杆菌WZ‑2，该降解菌从戊唑醇污染的菜地土壤中分离获得。该菌株已于2018年1月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC NO.15301。本发明提供的降解菌WZ‑2制成菌悬液后，可以通过直接加入土壤的方式应用于土壤中戊唑醇的降解，能快速的降解土壤中残留的戊唑醇，从而降低戊唑醇对土壤环境的生态压力，起到修复戊唑醇污染土壤，保护生态环境的作用。该菌株的菌剂制备工艺简单，效率高，成本低，无二次污染，具有良好的应用前景。

该项目 成功 构建 了 一株高 产碱 性果 胶 酶的毕 赤酵 母工 程 菌 (Pichia pastoris GS115),通过对发酵过程的优化控制，在 3L 罐中酶活达到 890U/mL。 在此基础上进行了碱性果胶酶的中试及其工业化研究，在 10 吨发酵罐中产酶达到 1305U/mL.采用该重组碱性果胶酶代替传统的强碱高温工艺，废水 COD 显著降低，可生化性较大提高。处理体系 pH 值为 9.4，代于碱精练水平；酶处理温度低于碱处理，这些结果对棉织物前处理的清洁生产具有重要的应用价值。