本项目涉及阿尔茨海默症基因治疗法与治疗领域。更具体地，本发明涉及利用基因工程技术构建含有 dhcr24 基因的复制缺陷型重组腺病毒，以及这些腺病毒载体在将 dhcr24 基因转移入细胞以及实现 DHCR24 蛋白在神经细胞等细胞中特异性过表达的应用。制备的重组腺病毒有望在阿尔茨海默症以及糖尿病等疾病的基因治疗中获得肯定的疗效。

本项目涉及阿尔茨海默症基因治疗法与治疗领域。涉及利用基因工程技术构建含有DHCR24基因的复制缺陷型重组腺病毒，以及这些腺病毒载体在将DHCR24基因转移入细胞以及实现DHCR24蛋白在神经细胞等细胞中特异性过表达的应用。制备的重组腺病毒有望在阿尔茨海默症以及糖尿病等疾病的基因治疗中获得肯定的疗效。 主要指标： 1. 在疗效确认的基础上，进行药物代谢动力学实验，研究其腺病毒表达蛋白DHCR24在体内表达及到达高峰及降解时间，提供药代研究的一系列资料。 2. 安全性确认：利用急性毒性试验采用大剂量注射方法，对选定候选重组腺病毒进行临床前安全性评价。

癌症已成为公众健康的重大杀手，每年因癌症死亡的人数接近1000万，传统的放疗、化疗由于过高的毒副作用，外科手术部位有限而难以有效治疗，靶向药物的发展极大推动了肿瘤治疗，然而也存在易产生耐药性等问题。免疫疗法作为新兴的肿瘤治疗策略，具有精准打击、低毒副作用、不易产生耐药等优点逐步受到关注，其中溶瘤病毒能够选择性在肿瘤细胞中复制而不破坏正常细胞，因而具有很大的应用前景（详细内容见前期推送科普系列——溶瘤病毒肿瘤治疗）。目前许多溶瘤病毒以实体瘤为治疗靶标，而应用于血液肿瘤的成功案例却很少。近日，吉林大学生命科学学院于湘晖课题组在国内主办的SCI杂志Signal Transduction and Targeted Therapy上在线发文，题为“Enhancing the antitumor activity of an engineered TRAIL-coated oncolytic adenovirus for treating acute myeloid leukemia”，该研究构建了表达TRAIL融合蛋白的溶瘤腺病毒，与人参皂苷Rh2联用，实现选择性杀伤血液肿瘤，为白血病的治疗提供了新思路。急性髓系白血病（AML）是髓系造血干细胞或祖细胞的恶性病变，原始细胞异常增生、分化。尽管一线治疗、巩固化疗的方案能够完全缓解许多患者病症，但是仍有部分患者无明显疗效，还有一些患者存在复发情况，亟需新的治疗方式。之前的研究中，研究者曾构建了表面展示肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的腺病毒，能够结合肿瘤表面死亡受体DR4和DR5，诱导细胞凋亡，减弱病毒肝脏趋向性。为了更好评估病毒载体的感染与复制造成的影响，研究者通过流式细胞仪分析了病灶内分离的AML细胞上的TRAIL受体（死亡受体DR4/5、诱饵受体DcR1/2）和腺病毒受体（CAR、整合素 αvβ3 和整合素αvβ5），发现多数表达中等水平TRAIL受体，培养细胞系也有类似现象，而正常粒细胞、T细胞这两类受体表达很低，因此选择TRAIL表面展示腺病毒能够较好进行靶向治疗。研究者为构建溶瘤腺病毒，通过将腺病毒A3衣壳蛋白IX插入“拉链结构”，使得TRAIL能够与“拉链结构”偶联展示在衣壳蛋白表面。由于只有约17%的衣壳蛋白连接上了TRAIL，研究者试图采用新的策略：在大肠杆菌中表达可溶性TRAIL-“拉链结构”融合蛋白，再将可溶性的蛋白与病毒粒子孵育，离心后分离表面覆盖可溶性TRAIL的腺病毒粒子。通过变性凝胶电泳、高效液相色谱、斑点杂交等证实了改造的腺病毒zA4载有活性更高的TRAIL。细胞实验也证明zA4相较于原来的版本A3、A4侵染能力、特异性显著提高。细胞结合试验用于评估侵染活性，证明了携带TRAIL显著促进了腺病毒的内吞；定量PCR试验用于评估病毒复制能力，zA4在癌细胞中复制显著强于其他载体。为有效评估zA4载体抗白血病活性，在不同感染复数下以不同载体侵染培养AML细胞系，结果发现zA4显著诱导培养细胞的凋亡。对临床分离原代AML细胞深入探究，zA4显著抑制了大部分AML细胞的增殖，然而值得注意的是，少部分不表达死亡受体的细胞无明显变化。溶瘤病毒能否在体内发挥作用直接决定了其是否具有临床价值，基于之前的细胞实验，研究者对皮下移植造模小鼠注射了腺病毒载体，发光成像和病毒基因组分析均证实了载体肿瘤组织靶向性。zA4处理小鼠显著抑制肿瘤生长，正常器官组织形态学、生化特征均未变化，因此未产生肝损伤。同时还观察到凋亡重要因子caspase-3水平显著上调。在更加真实的小鼠白血病模型中，也观察到相似的结果，病毒在肿瘤消失后也并不会长时间存在。然而总有一些原代AML细胞TRAIL表达量很低，影响zA4的效果。联系之前的研究，人参皂苷Rh2能够诱导白血病细胞死亡受体表达和细胞毒性，研究者就试图通过Rh2增强TRAIL诱导的细胞死亡。通过IC50测定、信号通路分析证实了存在协同效应，在细胞、小鼠水平上都得到了证实，两者联合使用促进白血病肿瘤的凋亡。该研究通过优化载体结构、联合用药等方式增强了溶瘤腺病毒的活性，拓宽了溶瘤病毒的潜在适应症范围，后续深入的分子机制探究以及疗效的评估将有助于为白血病治疗开辟新的道路。

四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室研发的新冠病毒重组蛋白疫苗已开展动物实验，该实验室发挥自身的技术优势，联合浙江特瑞斯药业、成都国家GLP中心、四川省人民医院以及国药成都生物制品研究所等单位进行协同攻关。 该疫苗的研发得到了四川省、教育部与科技部以及成都市等方面的高度重视与大力支持。研究团队力争在3-4个月内，通过小鼠、兔与猴等动物实验与一系列的研究，证明该疫苗的有效性与安全性，向国家进一步申报人体临床试验。 新冠病毒重组疫苗动物实验研究

已有样品/n成功构建了新型黑猩猩型腺病毒AdC68和AdC7作为疫苗载体，以此为基础，分别研制了两种新型的埃博拉疫苗，即AdC68-EBOVgp、AdC7-EBOVgp，并在小鼠、非人灵长类动物中都验证其免疫原性及保护性效果。对于埃博拉疫情的控制，目前尚无有效手段，以黑猩猩型腺病毒为载体的新型埃博拉疫苗的研发成功不仅将满足患者的需求，而且将解决这一重大的公共卫生问题，产生巨大的经济效益和重大的社会价值。

创制出了一种基于细胞悬浮培养技术的血清 4 型禽腺病毒灭活苗。通过悬浮培养技术，该血清 4 型禽腺病毒效价可达到 109 TCID50/ml，是传统鸡胚培养获得的病毒效价的 100 倍。动物免疫效果表明，免疫后 21 天攻毒，非免疫对照组鸡均全部死亡，观察期内发病鸡多表现精神沉郁、羽毛粗乱、食欲不振，剖检可见心包积液、肝脏病变等相关组织病变；免疫组均为 100%保护，观察期内未见任何异常现象，剖检未见腺病毒相关组织病变。高效价血清 4 型禽腺病毒灭活苗的研制可大大降低疫苗的成本，提供疫苗免疫效果，具

四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室研发的重组蛋白新冠疫苗于2020年8月21日获得国家药监局临床试验批文。8月28日，Ⅰ期临床研究在中国医药城启动培训工作。目前，所有受试者感觉良好，没有出现不良反应。该疫苗靶向SARS-CoV-2使用其刺突蛋白受体结合域（S-RBD），产生中和抗体阻断病毒感染人体细胞。7月29日，四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室作为第一作者单位和通讯作者单位，在Nature 在线发表题为“A vaccine targeting the RBD of the S protein of SARS-CoV-2 induces protective immunity”的研究论文，该论文的通讯作者是魏霞蔚研究员、逯光文教授与张康教授，第一作者是杨静云博士、王玮教授以及杨自敏博士等，这也是Nature杂志发表的第一篇新冠疫苗研究论文。该疫苗在猴子等动物实验，发现有很好的预防SARS-CoV-2感染的保护作用，未见明显的副作用。 该疫苗利用昆虫细胞在培养液中大量繁殖，将新冠病毒的基因引入昆虫细胞，该细胞作为工厂生产出高质量的重组疫苗蛋白，并进行精致纯化，该技术易于大规模生产投入市场。利用昆虫生产重组蛋白疫苗，在欧美等国家已有宫颈癌疫苗与流感疫苗上市，其在人体的安全性得到了验证。团队正在积极推进该疫苗的临床试验与落户成都高新区实现产业化，正在规划与设计年产上亿针的生产线。该疫苗的研发过程中也得到了国家科技部、国家卫健委与教育部，与省市等部门的大力支持，也得到了国内多家科研单位参与合作。四川大学华西医院、疫苗研究团队与生物城成立了成都威斯克生物医药有限公司，正在规划与设计年产上亿针的生产线，将实现全套设备国产自主研发。

已有样品/n成功将全长的西妥昔单抗基因分别克隆至腺病毒载体AdC68和Hu5，构建重组腺病毒AdC68-CEb和Hu5-CEb，通过WesternBlot4证明成功表达了西妥昔单抗；我们进一步通过夹心ELISA对表达的西妥昔单抗进行了定量，产量分别为639g/L和522g/L；同时，我们通过间接免疫荧光证明了所表达的西妥昔单抗与EGFR结合的特异性；并通过MTT实验证明了AdC68-CEb和Hu5-CEb显著抑制结直肠癌细胞的生长，而对正常细胞没有抑制作用；动物实验显示，用AdC68-CEb和Hu5

在我国，膀胱癌在泌尿系统肿瘤中占第一位，在经济、社会发展 中造成了严重的损失，危害十分严重。传统的放、化疗存在抗肿瘤能 力低、杀伤指数过小、副作用大等缺点。治疗效果远远不能令人满意。 因此，探索新的治疗理念、策略和途径，提高膀胱肿瘤的治疗效果， 显得十分迫切。 腺病毒是理想的肿瘤基因治疗和生物治疗载体。腺病毒载体由于 具有易于制备高滴度病毒、可感染分裂期和非分裂期细胞以及不整合 到宿主基因组等优点而成为

已有样品/n目前在临床上，两种PD-1单抗的使用剂量为2-3mg/kg，每2-3周静脉输入，历时30-60分钟。使用剂量大且频繁。同时，单克隆抗体的制备、纯化过程繁琐，要求严格，导致单抗的价格昂贵，使受益于该单抗的病人在接受治疗时受到极大限制。由于腺病毒制备、纯化简单、产量高、安全性好、外源表达时间长等特点，因此我们研发的腺病毒表达PD-1单抗制备简单、成本低、疗效好、使用方便，可充分满足临床病人的需求。我们研发的重组腺病毒载体表达PD-1单抗为临床相关肿瘤的治疗与研究提供了一种有效的新手段，并具有