基于可切割自聚集标签的多肽表达纯化方法
01. 成果简介 本项成果提供了一种多肽的合成方法,利用了自聚集短肽诱导目标多肽的聚集,使得生物合成的多肽以沉淀形式保护下来,从而避免降解;然后通过体外切割,获得目标多肽,优化了多肽合成和分离的工艺,操作简便且不受多肽的长度限制,有望为多肽药物的高效制备提供一种解决方案。 具体的,在目标多肽的N端或C端融合一段自聚集短肽,这两者之间采用一个连接肽将两者融合。这个连接肽可以是化学切割、酶切割的识别序列或自切割肽(内含肽)。通过分子克隆,将这三段肽(目标肽、连接肽、自聚集短肽)克隆并转化至表达菌株(如大肠杆菌BL21(DE3))中进行表达。随后通过离心或过滤收获菌体,利用高压、超声波等技术进行细胞破碎;再通过离心或过滤收集不可溶部分(聚集体);在简单洗涤后,根据所选的连接肽的属性进行切割,如化学切割,蛋白酶切割或诱导自切割;再通过离心或过滤去除不可溶部分,收集上清即可得到粗纯多肽产品。如下图所示: 02. 应用前景 基于本项技术可以合成糖尿病仿制药利拉鲁肽、矮小症仿制药生长激素(hGH)等。03. 知识产权 相关成果已授权3项中国发明专利及1项美国专利。04. 团队介绍 团队主要研究领域为合成生物学和生物制药(包括他汀类化学药物和多肽药物),负责人林章凛博士为教授、博士生导师,教育部长江学者,广东省“珠江人才计划”科技领军人才。先后承担973、863、国家重点研发计划专项、国家自然科学基金等科研项目,发表SCI论文50余篇,申请专利20余项。05. 合作方式 商务合作。06. 联系方式 lijiaoli2016@tsinghua.edu.cn biyangxf@scut.edu.cn
清华大学
2021-04-13