一种构建多位点突变重组表达质粒的高效方法

本发明公开了一种构建多位点突变重组表达质粒的高效方法，包括如下步骤：将表达质粒pHAT2用双酶切方法采用两种限制性内切酶NcoI和XhoI酶切产生带有粘性末端5’‑CATG‑3’和5’‑AGCT‑3’线性片段，回收线性化质粒片段备用；PCR引物设计；进行三轮PCR反应得到突变表达载体；进行连接反应；构建突变表达载体。本发明具有突变率高、简单易行的特点。

青岛农业大学 2021-04-13

突变型人纤溶酶原kringle5及其制备方法及应用

单克隆抗体可以用于制备治疗PEDF升高的创伤愈合疾病的药物。 一、项目分类 重大科学前沿创新 二、成果简介 抗PEDF单克隆抗体的制备方法是用PEDF蛋白免疫BALB/c小鼠，再用免疫鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经筛选克隆获得分泌抗PEDF单克隆抗体的杂交瘤株，得到所需单克隆抗体。单克隆抗体可以用于制备治疗PEDF升高的创伤愈合疾病的药物。

中山大学 2022-08-15

二甲双胍治疗KRAS突变型结直肠癌的研究

 二甲双胍已被报道是一种潜在的新型抗肿瘤药物，但在结直肠癌临床实验中其治疗作用存在差异和争议。本研究发现，对于接受标准抗肿瘤治疗的合并糖尿病的KRAS突变型结直肠癌患者，服用二甲双胍其中位生存时间比服用其他降糖药物延长37.8个月；相反，二甲双胍不能改善野生型KRAS结直肠癌患者的生存时间。有趣的是，与临床分析一致，在细胞模型和PDX模型中，二甲双胍主要在KRAS突变细胞和肿瘤中积累，但不在KRAS野生型细胞和肿瘤中蓄积。机制研究表明，突变的KRAS蛋白通过上调DNA甲基转移酶1 (DNMT1)，导致二甲双胍排出细胞的转运泵分子 (MATE1) 高甲基化和表达下调。该研究结果为KRAS突变的结直肠癌患者受益于二甲双胍治疗提供了依据。该研究团队正在中山大学肿瘤防治中心进行前瞻性临床试验，将为二甲双胍的使用提供更直接的证据。

中山大学 2021-04-13

一种检测 SCN11A 基因第 673 位碱基突变的试剂盒

本发明提供了一种变异的 SCN11A 基因，即人类周围神经发作性疼痛致病基因 SCN11A，其特征在于该变异的 SCN11A 基因的第 673位碱基由野生型的 C 变异为 T；或该变异的 SCN11A 基因的第 2423位碱基由野生型的 C 变异为 G。本发明还提供了一种检测来源于人体生物样本中是否存在所述基因的突变方法及检测试剂盒。本发明提供的变异的人类 SCN11A 基因可用于制备人类周围神经发作性疼痛基因诊断芯片，变异的人类 SCN11A 基因所编码的蛋白质可作为治疗人类周围神经发作性疼痛的药

华中科技大学 2021-04-14

人胰岛素样生长因子结合蛋白7突变蛋白制法及用途

本发明提供一种人胰岛素样生长因子结合蛋白7突变蛋白，含有Arg198Ile/His200Phe的突变，具有SEQ ID NO.1的氨基酸序列。是从人结直肠癌细胞系SW480cDNA文库中选出igfbp7基因编码序列，然后构建到原核表达载体pET28a质粒中，使其能够在大肠杆菌菌株BL21中表达IGFBP7蛋白。在该表达载体的基础之上，构建人胰岛素样生长因子结合蛋白7突变蛋，转化BL21后表达纯化突变蛋白，指出IGFBP7与胰岛素结合的关键位点。本发明提供的突变蛋白，制备方法步骤简单可行且成功率较高，该蛋白与胰岛素的结合能力有明显降低，从而可以抑制胰岛素抵抗，可在制备治疗2型糖尿病药物中应用。

浙江大学 2021-04-13

一种高灵敏度的利用基因突变酵母细胞筛选抗朊病毒药物的方法

本发明（小试阶段）采用的技术方案是：将野生型酿酒酵母细胞内的分子伴侣SSA1基因编码的第483位亮氨酸突变为色氨酸，得到基因突变型SSA1-YS1酵母细胞；然后经SSA1-YS1酵母细胞的活化；初始OD值的调试；制备筛选待测药物检测溶液；从第一天起，隔天提取适量SSA1-YS1酵母细胞悬液稀释后平板涂布；置于24℃恒温培养箱中培养3天，再转入4℃冰箱中培养7天，观察SSA1-YS1酵母细胞的颜色。 将野生型酿酒酵母细胞内的分子伴侣SSA1基因编码的第483位亮氨酸突变为色氨酸，得到基因突变型SSA1-YS1酵母细胞；然后经SSA1-YS1酵母细胞的活化；初始OD值的调试；制备筛选待测药物检测溶液；从第一天起，隔天提取适量SSA1-YS1酵母细胞悬液稀释后平板涂布；置于24℃恒温培养箱中培养3天，再转入4℃冰箱中培养7天，观察SSA1-YS1酵母细胞的颜色。

辽宁大学 2021-04-11

S140G 突变型 KCNQ1 蛋白及其在筛选离子通道抑制剂和 促进剂中的应用

本发明公开了一种突变型 KCNQ1，即 S140G-KCNQ1。还公开了利用 KCNQ1 来筛选心肌 KCNQ1 钾离子通道的抑制剂的方法，它包括步骤：（a）将（i）表达 KCNQ1 表达载体和 (ii)KCNE1 表达载体或 KCNE2 表达载体转入哺乳动物细胞；（b）在转化的哺乳动物细胞 的培养基中，添加候选物质，并测定添加前后的电生理钾离子流，其中，如果加入候选 物质后的电生理钾离子流减小，则表明该物质是心肌 KCNQ1 钾通道的抑制剂。该方法可 快速筛选治疗房颤的候选药物。

同济大学 2021-04-13