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植物乳杆菌产细菌素研究及其在发酵香肠上的应用
一、成果简介 该课题受北京市自然科学基金项目“植物乳杆菌素对肉源李斯特氏病原菌作用机理研究”的资助，鉴于化学防腐剂在食品防腐应用中的不安全性，重点开展了新型生物防腐剂乳酸菌细菌素产生菌株的筛选，活性细菌素的分离纯化，细菌素及其产生菌株的应用研究。二、技术指标 从传统宣威火腿中分离筛选出一株高产
中国农业大学
2021-04-14
肽抗生素开发与研究 ——利用大肠杆菌表达兔防御
项目研究背景 ：抗菌肽是在某些诱导条件下，由动植物体内防御系统 产生的对抗外源性病原体致病作用的防御性阳离子多肽类抗菌活性物质。 抗菌肽具有特殊的抗菌机理和广谱高效的抗菌活性。天然抗菌肽获取困 难，主要是采用基因融合的方式进行外源表达。利用生物技术表达、改造 抗菌肽，提高抗菌肽抗菌活性，从而开发出对人体和环境安全无毒的食品 防腐剂和农药产品，还可开发出一类新的抗生素产品。 技术性能 ：本研究在国内首次报道利用大肠杆菌
南昌大学
2021-04-14
一种结核杆菌融合蛋白及其制备方法和应用
本发明所构建的融合蛋白 EAMM 能在大肠杆菌中稳定大量表 达，经纯化得到纯度较高的蛋白;构建的亚单位疫苗免疫动物能产生 针对结核杆菌特定抗原(ESAT-6、Ag85B、Mtb8.4 和 PPD)的特异 性的细胞免疫和体液免疫应答，具有较强的免疫原性。EAMM 亚单 位疫苗加强免疫后的结核菌载量明显少于 PBS 组和仅 BCG 免疫组， 表明清除结核分枝杆菌的能力较强。从组织切片 HE 染色
兰州大学
2021-04-14
天然有机酸根昆布氨酸酯在功能奶制品中的应用
本发明公开了一种天然有机酸根昆布氨酸酯在功能奶制品中的应用，其可作为牛奶安全添加剂，每种组合的天然有机酸根昆布氨酸酯经过毒理实验分析，可使小白鼠半致死量在5300‑7600mg/kg之间，属于实际无毒物质；昆布氨酸酯添加百分重量比为0.1‑1％，牛奶制品保质期延长，并具有预防高血压的保健功能。与现有技术中常采用的消毒法，即巴氏消毒法相比，本发明昆布氨酸酯弥补了巴氏消毒技术的缺陷，对耐热性丝衣霉属等微生物有抑制作用，起到延长保鲜保质作用，如保鲜期比单独巴氏消毒法保鲜保质期延长5‑83天。本发明有机酸根昆布氨酸酯在功能奶制品中的新应用，其一剂多效，既有保鲜作用，又有预防高血压保健作用，增加了牛奶制品的花色品种，并且，有机酸根昆布氨酸酯是天然海洋非蛋白氨基酸衍生物，与传统氧化型消毒剂、含苯结构功能分子相比，生态环保，有更好的生物相容性，满足食品的安全要求，有良好的经济效益与社会效益前景。
青岛大学
2021-04-13
重组大肠杆菌生产磷脂酶D及转酯化产品开发
磷脂酶D（PLD,EC 3.1.4.4）是一类广泛存在于各种生物体的酶，具有水解作用和磷酰基转移作用（见图1）。作为一种酶制剂，PLD的转磷脂酰活性尤为重要，被用于制备具有生物活性的稀有磷脂。其中，以大豆磷脂酰胆碱（PC）为底物，PLD酶法制备磷脂酰丝氨酸（PS），受到广泛关注。PS作为脑健康营养补充剂，相继被美国FDA、日本HBM和中国国家卫生计生委所认证，列为新资源食品。相较于提取自牛脑和植物的PS，生物酶法制备的PS，避免了食品安全和植物源含量低的问题。进一步，一些新的结构和功能磷脂，通过PLD转磷脂酰反应被合成出来，例如，磷脂酰鲨肝醇、磷脂酰葡萄糖、心磷脂类似物、磷脂酰酪醇、磷脂酰萜烯和磷脂酰丝氨醇，它们中一些具有抗癌和抗氧化活性。
直到现在，受限于磷脂酶D来源不足和价格高（链霉菌属PLD，≥150 units/mg，6516.9¥/1000 U，Sigma公司），其工业上的广泛应用受到限制。例如，文献报道的PLD最高产量在104-105U·L-1，而制备转化得到每公斤PS，需要2.6×106U的PLD。这一障碍的主要原因是高水平表达的PLD对宿主的严重细胞毒性，导致细胞死亡。
历经5年时间，从上游到下游整体设计，我们解决了毒性蛋白（磷脂酶D，PLD）异源表达难的问题（质粒不稳定、蛋白合成时间短、细胞生长抑制和裂解），PLD生产达到目前世界最高水平106U·L-1(748 mg·L-1)（提高20倍）；同时发展一种简单有效提取重组磷脂酶D的方法（无需破碎、无需添加溶菌酶和有机溶剂、室温进行），PLD生产成本有望降低20倍以上。按照实验室规模的一台5 L发酵罐，年产量可以提供3.5×108U的磷脂酶D，满足100 kg的PS转化需求计算（不计算PLD重复利用率），扩大反应器体积至100-1000 L，PLD产量可满足制备2-20吨PS的需求。
厦门大学
2021-01-12
一种结核杆菌融合蛋白及其制备方法和应用
本发明所构建的融合蛋白EAMM能在大肠杆菌中稳定大量表达，经纯化得到纯度较高的蛋白；构建的亚单位疫苗免疫动物能产生针对结核杆菌特定抗原（ESAT-6、Ag85B、Mtb8.4和PPD）的特异性的细胞免疫和体液免疫应答，具有较强的免疫原性。
兰州大学
2021-01-12
一种枯草芽孢杆菌的简易迭代编辑工具及其应用
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌的简易迭代编辑工具及其应用。该工具包括两个质粒：pQ‑Cas9n和pC‑TS。pQ‑Cas9n质粒包含Cas9n基因和诱导型启动子，用于表达Cas9n蛋白。pC‑TS质粒包含温敏性复制蛋白，可以实现质粒的温度筛选消除。该工具实现了高效的基因编辑，显著缩短了编辑周期，并支持多基因的快速打靶和编辑，满足了复杂基因组编辑的需求。同时，本发明采用双质粒系统，通过温敏性复制蛋白实现了质粒的温度筛选消除，简化了质粒消除和再引入的步骤，本发明支持多轮迭代编辑，在编辑完成一个基因后，可以快速消除质粒并引入新的质粒进行新的位点编辑，实现了高效的多轮编辑。
南京工业大学
2021-01-12
聚 β 羟基丁酸酯与异亮氨酸联产菌代谢工程改造
本研究构建一种谷氨酸棒杆菌基因工程菌，使其同时发酵生产两种产品：聚羟基脂肪酸酯和异亮氨酸；前者是胞内产品，后者是胞外产品。该基因工程菌可以降低生产成本，具有工业应用前景。研究结果显示：将 phaCAB 基因簇导入 WM001后，WM001/pDXW-8-phaCAB 96h 产量为 9.58 g/L，而 WM001/pDXW-8 96h 产量为6.65 g/L，产率提高 65%达到 0.15g 异亮氨酸/g 葡萄糖。PHA 产量达到 28.7%(w/w)。
关键技术
聚羟基脂肪酸酯（PHAs）是部分微生物生存在具有较高碳源与氮源的条件下，生成的一类微生物自身碳源、能源储备物的胞内聚酯。根据相关报道，将 PHB 合成代谢基因簇导入细胞内，可实现 PHB 与某些代谢产物的联产和增产，提高底物的利用率。L-异亮氨酸是一种人体必需氨基酸，因其在医药、食品和健康保健领域有广泛的应用，而使其近几年的生产能力发展迅速，目前国际上比较先进的主流生产方式为发酵法生产 L-异亮氨酸。谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriumglutamicum)是一种小棒状、革兰氏阳性的食品安全生产菌，目前已经用于工业生产 L-异亮氨酸，本成果构建能高产 PHAs 的 C. glutamicum 菌株，具有工业化应用潜力。
江南大学
2021-04-11
班克木培养基及组织培养与快速繁殖方法
本发明提供了用于班克木的培养基，以及班克木的组织培养与快速繁殖方法。所述班克木专用培养基为改良wpm培养基，包含下列元素成分：nh4no3，200～400mg/l；ca(no3)24h2o，250～600mg/l；kcl，400～900mg/l；cacl22h2o，90～200mg/l；mgso4，180～400mg/l；所述班克木组织培养与快速繁殖方法，包括外植体的消毒和无菌苗的获得，腋芽诱导和继代培养，生根培养和试管苗移栽。本发明提供的班克木培养基和组织培养方法极大地提高了班克木的繁殖系数和生根率，建立了一套完整的快速繁殖技术体系，为班克木的大面积推广应用提供了技术支持。
北京林业大学
2021-02-01
班克木培养基及组织培养与快速繁殖方法
项目成果/简介:本发明提供了用于班克木的培养基，以及班克木的组织培养与快速繁殖方法。所述班克木专用培养基为改良wpm培养基，包含下列元素成分：nh4no3，200～400mg/l；ca(no3)24h2o，250～600mg/l；kcl，400～900mg/l；cacl22h2o，90～200mg/l；mgso4，180～400mg/l；所述班克木组织培养与快速繁殖方法，包括外植体的消毒和无菌苗的获得，腋芽诱导和继代培养，生根培养和试管苗移栽。本发明提供的班克木培养基和组织培养方法极大地提高了班克木的繁殖系数和生根率，建立了一套完整的快速繁殖技术体系，为班克木的大面积推广应用提供了技术支持。
北京林业大学
2021-04-11