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重组大肠杆菌生产磷脂酶D及转酯化产品开发
磷脂酶D(PLD,EC 3.1.4.4)是一类广泛存在于各种生物体的酶,具有水解作用和磷酰基转移作用(见图1)。作为一种酶制剂,PLD的转磷脂酰活性尤为重要,被用于制备具有生物活性的稀有磷脂。其中,以大豆磷脂酰胆碱(PC)为底物,PLD酶法制备磷脂酰丝氨酸(PS),受到广泛关注。PS作为脑健康营养补充剂,相继被美国FDA、日本HBM和中国国家卫生计生委所认证,列为新资源食品。相较于提取自牛脑和植物的PS,生物酶法制备的PS,避免了食品安全和植物源含量低的问题。进一步,一些新的结构和功能磷脂,通过PLD转磷脂酰反应被合成出来,例如,磷脂酰鲨肝醇、磷脂酰葡萄糖、心磷脂类似物、磷脂酰酪醇、磷脂酰萜烯和磷脂酰丝氨醇,它们中一些具有抗癌和抗氧化活性。 直到现在,受限于磷脂酶D来源不足和价格高(链霉菌属PLD,≥150 units/mg,6516.9¥/1000 U,Sigma公司),其工业上的广泛应用受到限制。例如,文献报道的PLD最高产量在104-105U·L-1,而制备转化得到每公斤PS,需要2.6×106U的PLD。这一障碍的主要原因是高水平表达的PLD对宿主的严重细胞毒性,导致细胞死亡。 历经5年时间,从上游到下游整体设计,我们解决了毒性蛋白(磷脂酶D,PLD)异源表达难的问题(质粒不稳定、蛋白合成时间短、细胞生长抑制和裂解),PLD生产达到目前世界最高水平106U·L-1(748 mg·L-1)(提高20倍);同时发展一种简单有效提取重组磷脂酶D的方法(无需破碎、无需添加溶菌酶和有机溶剂、室温进行),PLD生产成本有望降低20倍以上。按照实验室规模的一台5 L发酵罐,年产量可以提供3.5×108U的磷脂酶D,满足100 kg的PS转化需求计算(不计算PLD重复利用率),扩大反应器体积至100-1000 L,PLD产量可满足制备2-20吨PS的需求。
厦门大学 2021-01-12
一种巴斯德毕赤酵母、产生的耐高温酶及应用
本发明提供一种巴斯德毕赤酵母、产生的耐高温蛋白酶及应用,属于微生物技术领域;本发明通过选育一种可产生耐高温酶的巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)AN‑PK‑9K‑GS115,然后将其进行培养,从发酵液中提取耐高温蛋白酶,将其用于羽毛粉的水解,可以有效水解羽毛粉,将其中蛋白质组分高效降解为小肽成分或者氨基酸成分,从而提高蛋白质的消化率,增加采食量,提高动物健康水平。 (注:本项目发布于2019年)
华中农业大学 2021-01-12
固定化磷脂酶A1在制备磷脂DHA中的应用
本发明提供了一种固定化磷脂酶A1在制备磷脂DHA中的应用,具体过程为,六水硝酸钴和2‑甲基咪唑分别溶于无水甲醇得到六水硝酸钴溶液和2‑甲基咪唑溶液,将2‑甲基咪唑溶液滴加至六水硝酸钴溶液中,搅拌反应、静置、干燥,得到ZIF‑67纳米材料,将ZIF‑67纳米材料于磷酸钠缓冲液中混悬,加入磷脂酶A1溶液,调节pH,置于摇床孵育,离心、干燥,获得ZIF‑67纳米材料固定化磷脂酶A1;将游离脂肪酸和大豆卵磷脂组成的底物和固定化磷脂酶A1在有机反应体系中进行催化反应,分离纯化获得磷脂DHA。固定化磷脂酶A1,稳定性好,催化制备磷脂DHA,DHA掺入率高达51.04%。
南京工业大学 2021-01-12
基于固定化酶生产低分子量肝素的新工艺
低分子量肝素(LMWH)是临床上最主要的天然抗凝剂,目前主要是通过动物来源的肝素进行酶降解制得。欧洲药典要求 LMWH 的分子量为 6000~8000,质量控制是生产 LMWH 的重要环节。而肝素酶的活性和利用率直接影响 LMWH 生产成本和产业经济。 本项目组利用融合肝素酶 I (Hep I)与甲壳素之间的亲和作用,实现酶的循环利用,同时融合酶活性和稳定性提高。利用绿色溶剂体系制备形态完好、尺寸均一的甲壳素微球。用固定化酶制备的 LMWH 产品达到欧洲药典要求,实现了分子量可控,生产过程可实时监测。该项目将对 LMWH 产业的绿色和经济生产提供技术支持。目前已发表 SCI 论文 2 篇,并与相关企业开展了合作。 
江南大学 2021-04-13
高性能角蛋白酶的高效表达与应用研究
角蛋白酶是一种特异性蛋白酶类,可降解结构复杂、硬质难溶的角蛋白,具有多种优良的催化特性,在生物加工、绿色制药、废弃生物质处理、生物制革、生态纺织、洗涤剂等实际应用中备受关注,被认为是有着巨大应用潜力和市场前景的新一代蛋白酶类。 本项目从角蛋白酶基因挖掘、高效表达、性能改造及其应用研究等方面开展了一系列工作。课题组目前建立了角蛋白酶资源库,是我国拥有角蛋白酶基因资源产权最多和最具多样性来源的单位;实现了角蛋白酶基因在大肠杆菌及枯草芽孢杆菌等外源宿主中的克隆及高效表达;在 5L 罐上发酵酶活最高可达10000 U/mL 以上,是目前文献报道的重组角蛋白酶表达最高水平;项目已完成了 1M3 规模中试试验,成本降低 30%以上。在应用方面,本项目成功将角蛋白酶用于生物法制备纳米银粒子 AgNPs,与传统化学法相比,酶法合成的纳米银具有更好的抑菌活性。另外,项目组已首次开发出无胶原活力的高特异性角蛋白酶,具有高角蛋白活力,不会对皮革胶原造成破坏,能保护胶原结构完整性,可开发出不伤及皮肤真皮的洗涤剂产品、药品及化妆品,在生物制革领域也具有极大应用价值,可缓解制革工业中的烂皮现象;同时本研究所开发的角蛋白酶在活性多肽制备中也表现出良好的应用前景。
江南大学 2021-04-13
一种电机内置的高速直联精密磨削砂轮主轴系统
本发明公开了一种电机内置的高速直联精密磨削砂轮主轴系统,属于机械设计技术领域。该主轴系统主要包括主轴(1)、与主轴(1)压配为一体的电机转子(2)、设置在电机转子(2)外侧的电机定子(3)、与主轴(1)直联的砂轮主轴(12)、设置在砂轮主轴(12)上的砂轮安装座(13)、砂轮紧固端板(14)、设置在砂轮安装座(13)砂轮紧固端板(14)中间的的砂轮(12)以及支撑轴系的三个高速滚动轴承。本发明提供的一种电机内置的高速直联精密磨削砂轮主轴系统,创新地采用了电机内置、驱动轴砂轮轴直联、三支点式支撑等技术方法,具备结构紧凑,转速高,刚度大,磨削精度高等特点,可满足高精密高刚性磨削的加工需要。
东南大学 2021-04-13
华为联合天翼物联等伙伴发布5GtoB终端认证标准2.0
近日,5GtoB终端认证标准2.0线上发布会在深圳召开。华为联合天翼物联等26家合作伙伴共同发布了5GtoB终端认证标准2.0。
华为技术有限公司 2022-09-19
深圳市联特微电脑信息技术开发有限公司
        深圳市联特微电脑信息技术开发有限公司(以下简称“联特微公司”)成立于2000年4月,是一家专业的教育系统集成商,具备丰富的教育信息化、智能化项目咨询、设计、施工、维护、培训服务经验。公司专注于为教育行业客户提供未来学校、人工智能及创新教育、实验室共建、智慧校园、教学与科研仪器设备、专业共建、人才培养、校企合作等整体解决方案。         联特微公司按照ISO9001标准,建立了科学、规范的质量管理体系,全面部署实施了CRM、ERP企业信息化。公司秉承人性化管理,倡导“创新、实干、包容、感恩”的理念,遵循客户满意、员工满意、股东满意、社会满意的质量方针。         联特微公司是大湾区产教联盟副理事长单位、腾讯智慧校园战略合作伙伴、华为全线产品合作伙伴、科大讯飞AI创新教育合作伙伴、商汤AI创新教育合作伙伴、大疆无人机/机器人实验室合作伙伴、德国EOS 3D打印机战略合作伙伴、天津镭明金属3D打印机战略合作伙伴,并与其它一系列智慧校园优质厂商建立了长期战略合作伙伴关系。         联特微公司未来学校整体解决方案包括学校基础设施、教学平台、智慧功能场馆、实验室、智慧教学和管理等整体建设,涵盖了智慧教室、理化生智慧实验室、智慧体育、人工智能创新教育(3D打印机、3D扫描仪、无人机、机器人、自动驾驶、脑科学、人工智能课程)、智能制造(机器人、虚拟仿真实训、IOA数字孪生虚实结合实训等)、激光技术应用(激光雕刻机、激光切割机、激光打标机等)、金工实验室、心理咨询室、智慧图书馆、科学报告厅、科学馆、科普教室(VR科普资源、AR互动沙盘、全息数字模型教育系统)、劳技馆、校园电视台、录播教室、天文数字课堂、数字书法教室、智慧音乐教室、数字地理教室、数字历史教室、数字美术教室、数字探究学习系统、AR教学系统、3D智能全景互动教学系统、实训教学移动式视频管理系统、智慧校园云平台、走班教学排选课、网上阅卷、大数据精准教学系统、电教平台、智能吊麦扩声系统、智慧班牌、数字校园文化、地理园、生物园、标本馆、生态馆、教室护眼节能照明、校园物联网、云系统(私有云、桌面云)、微模块机房、校园一脸通、广播系统、综合安保系统、综合布线系统、计算机网络系统、网络安全系统等,已经成功应用于深圳市各普校、高校、职校,涉及深圳市教育局直属、深圳市人力资源和社会保障局直属、福田区、罗湖区、盐田区、南山区、宝安区、龙岗区、龙华区、坪山区、光明区、大鹏新区学校。            联特微公司依托国家政策,引领技术潮流,立足5G技术、聚焦AI,赋能教、学、管、评。包含了5G赋能教学教研、AI赋能精准教学、AI赋能机器人伴学、AI赋能校园管评、AI赋能校园平安等系统。为学校精选推出人工智能+5G整体解决方案,从智能识别、无人机(机器人)、云计算、VR/AR、物联网、大数据应用这六个方向进行课程的展开,培养学生的核心素养。并建设与课程相对应的人工智能实验室、天文创客(VR)教室、编程无人机教室、编程机器人教室、VR实验室等。         联特微公司作为德国EOS 3D打印机战略合作伙伴,促成其与深圳职业技术学院签订科研和教学合作框架协议,探索“企业学院科研合作”新培养模式,并成功中标深圳职业技术学院创客中心金属3D打印机、激光焊接机和激光打标机项目。
深圳市联特微电脑信息技术开发有限公司 2021-12-07
一种检测TNF-α的光电免疫传感器及其制备方法和应用
本发明公开了一种检测TNF?α的光电免疫传感器及其制备方法和应用,光基底电极表面依次经GO?PTC?NH2溶液、anti?TNF?α溶液修饰,所述基底电极为玻碳电极或氧化铟锡半导体电极。本发明利用GO?PTC?NH2纳米复合物制备光电免疫生物传感器用于肿瘤标志物检测的方法,与传统的酶联免疫吸附以及PCR等方法相比具有操作简便、技术要求低、反应迅速的特点,所使用的光电探针摒弃了传统金属材料等的光腐蚀等弊端,稳定性较好且负载量大,功能化基团多,便于修饰。
东南大学 2021-04-11
细胞新型自噬受体调控机体抗病毒天然免疫反应的新机制
该研究发现RNA病毒感染宿主细胞可诱导表达一种新型自噬受体CCDC50,该自噬受体通过识别K63型泛素化修饰的RNA病毒模式识别受体RIG-I/MDA5(RLR)并介导后者的自噬途径依赖的降解,从而抑制病毒感染诱导的I型干扰素的产生,帮助机体恢复到静息状态,避免过度免疫反应造成的组织损伤和自身炎症。我校博士后侯盼盼为论文第一作者,郭德银教授为通讯作者,我校医学院、附属第七医院为第一作者单位。       天然免疫是一种非特异性的宿主抵抗病原微生物入侵的免疫反应,它广泛存在于机体的绝大部分细胞,被认为是机体抵抗病原体感染的第一道防线。随着近几十年的研究,人们对天然免疫系统愈发了解,已经发现并鉴定出天然免疫反应的关键调控因子和信号转导因子,然而某些重要调控因子的结构和功能机制依然不清楚,且这些调控因子的生理和病理作用尚有待于研究。郭德银教授课题组利用CRISPR/Cas9第二代文库在免疫细胞中进行了全基因组水平的大规模无偏差筛选,发现了一系列参与天然免疫反应调控的新型基因。进一步的验证过程中发现CCDC50蛋白在RNA病毒感染下表达量显著增加且其表达模式和RLR的表达模式一致,提示着CCDC50可能参与调控RLR介导的信号通路活性。为了进一步验证该观察结果,该课题组构建了CCDC50条件缺失的小鼠模型,攻毒实验结果证明缺失CCDC50后,病毒感染条件下,I型干扰素表达上调,其下游的ISGs表达水平也随之升高,小鼠清除病毒能力增强,肺部组织损伤和炎性浸润减少,且小鼠存活率增加,从而证明CCDC50在机体水平具有生理学功能。       进一步的机制探究中,该课题组发现CCDC50特异性识别K63泛素化修饰的RLR,并促进激活的RLR的自噬途径依赖的降解,此机制不同于以往了解较多的K48泛素化依赖的降解调控。该过程的发生并不依赖于常见的自噬受体p62, 因p62缺失后,CCDC50依然可以促进RLR的降解,但CCDC50可与p62协同作用。刘迎芳教授团队解析了CCDC50分子LIR结构域和LC3复合体的晶体结构,结构分析证明CCDC50中存在一段非典型的LIR基序,该基序可以结合位于LC3的LDS结合位点,将K63泛素化修饰的RLR拉进自噬小体。有趣的是,紧邻LIR基序,CCDC50有一段MIU基序,该基序可称为反向UIM基序,体外生化实验证实CCDC50-MIU可以结合在LC3的UDS位点,进而证明CCDC50是一种新型自噬货物受体,可以以两段不同的疏水基序结合在LC3的不同位点。这类自噬货物受体是首次在生物体内被发现
中山大学 2021-04-13
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