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结核分枝杆菌融合蛋白 Mtb10.4-Hsp16.3 的构建.表达和 纯化方法及其应用
本发明选择结核杆菌生长期和休眠期主要的保护性抗原 Mtb10.4 和 Hsp16.3,构建融合蛋白 Mtb10.4-Hsp16.3(MH)。在大肠杆菌中表 达纯化该蛋白,将该蛋白和佐剂混合构建亚单位疫苗,分别于 BCG 初免后 12、14 周加强免疫 C57BL/6 小鼠两次,最后一次免疫 6 周后 检测细胞免疫反应,最后一次免疫后 10 周进行结核菌毒株&nb
兰州大学 2021-04-14
结核分枝杆菌融合蛋白 Mtb10.4-Hsp16.3 的构建.表达和 纯化方法及其应用
本发明选择结核杆菌生长期和休眠期主要的保护性抗原 Mtb10.4 和 Hsp16.3,构建融合蛋白 Mtb10.4-Hsp16.3(MH)。在大肠杆菌中表 达纯化该蛋白,将该蛋白和佐剂混合构建亚单位疫苗,分别于 BCG 初免后 12、14 周加强免疫 C57BL/6 小鼠两次,最后一次免疫 6 周后 检测细胞免疫反应,最后一次免疫后 10 周进行结核菌毒株&nb
兰州大学 2021-04-14
以人 FKBP51 蛋白为靶点的先导化合物及筛选方法与应用
雄激素受体(androgen receptor,AR)被认为在前列腺癌的发生、发展和转移中起到关键作用。因此,雄激素撤除疗法(androgendeprivation therapy)成为治疗晚期前列腺癌的最常用和有效的方法。但是在治疗的两到三年内,大部分晚期前列腺癌就会发展成去势抵抗性前列腺癌(CRPC)。对于 CRPC 目前缺乏有效治疗手段,成为前列腺癌治疗中最为棘手的问题。在雄激素撤除环境下,AR 的再激活存在多种途径,主要包括病灶部位雄激素的合成、AR 的基因突变、倍增和可变剪切以及 AR 共
兰州大学 2021-04-14
结核分枝杆菌融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3的构建.表达和纯化方法及其应用
本发明选择结核杆菌生长期和休眠期主要的保护性抗原Mtb10.4和Hsp16.3,构建融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3(MH)。在大肠杆菌中表达纯化该蛋白,将该蛋白和佐剂混合构建亚单位疫苗,分别于BCG初免后12、14周加强免疫C57BL/6小鼠两次,最后一次免疫6周后检测细胞免疫反应,最后一次免疫后10周进行结核菌毒株H37Rv攻击。结果:该融合蛋白能在大肠杆菌中稳定大量表达,经离子交换层析、凝胶过滤层析和疏水层析三步纯化得到纯度较高的蛋白;构建的亚单位疫苗免疫动物可产生针对结核杆菌特定抗原(Mtb10.4和Hsp16.3)的特异性细胞和体液免疫应答,具有较强的免疫原性;毒株攻击后,小鼠肺脏结核菌数量明显少于PBS组和BCG组。结论:本发明成功构建、表达和纯化不带任何标签的融合蛋白MH,此蛋白可诱导较强的细胞和体液免疫应答并具有一定的动物保护效应,有望成为临床结核病预防和治疗的候选疫苗。
兰州大学 2021-01-12
一种由生物油提取单酚化合物和热解木质素的方法
本发明公开了一种由生物油提取单酚化合物和热解木质素的方法,室温下将过滤后的生物油加入到去离子水中,超声震荡下分离得到水相和有机相;将得到的有机相溶于强碱溶液中,保证pH>12,并利用有机溶剂A萃取分离得到混合溶液中的中性组分;利用稀酸溶液将经过萃取后得到的碱溶液Ⅰ酸化至pH为5~7,过滤得到重均分子量大于1526的高分子热解木质素,滤液经有机溶剂B萃取分离得到单酚化合物,将再次萃取后得到的碱溶液Ⅱ酸化至pH为1~2,过滤得到重均分子量为319~1068的低分子热解木质素。本方法解决了生物油水不溶相的进一步利用问题,实现提取生物油高附加值化学品与制取燃料的有机统一,提高生物油的总体利用率。
浙江大学 2021-04-11
羊草水孔蛋白及其编码基因与应用
羊草水孔蛋白及其编码基因与应用,目前对于羊草的研究仅限于人畜的食用及成份分析等方面,而将其作为耐旱植物对其分子生物学方面的研究还少见报道.羊草水孔蛋白,是具有以下氨基酸序列的蛋白质:(1)序列表中的SEQ IDNo:1;(2)序列表中SEQ ID No:1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代,缺失或添加,且与SEQ ID No:1蛋白质序列具有相同活性的,由SEQ IDNo:1衍生的蛋白质.将本发明的水孔蛋白的编码基因转入其它植物,可增强转基因植物的抗旱能力.本发明应用于植物基因工程领域.
哈尔滨师范大学 2021-05-04
新型冠状病毒蛋白质组芯片
截止到2020年3月3日11时23分,我国累计已有新冠肺炎病例80302例,死亡2947人。我国的疫情防控已渐渐向好,但其它多个国家的疫情则呈快速上升和爆发趋势,引起了强烈关注,世界卫生组织总干事谭德赛28日在日内瓦宣布将新冠肺炎疫情全球风险级别由此前的高上调至非常高。基于流行病学数据,多名国内外专家预计新冠肺炎可能会长期流行。为了实现最终的有效防控,新冠肺炎的基础研究必须要迅速得到加强,其中尤为重要的两个方面是:1.对新冠肺炎康复人员血清中病毒特异性抗体的系统性分析;2.对病原-宿主相互作用的全局性研究。通过这些研究将可提供全面的免疫响应数据及提示病毒蛋白质的功能,为疫苗研发、中和抗体制备以及药物靶点的确定提供重要线索,进而加速新冠肺炎关键研究的进程。系统性的分析需要强力工具,包含新型冠状病毒(SARS-CoV-2)绝大多少甚至所有蛋白质的蛋白质组芯片是一个极佳的选项。据BioArt独家消息,上海交通大学系统生物医学研究院陶生策团队传来好消息。该团队对新型冠状病毒的全部27个预测的基因进行了密码子优化,并通过全基因合成得到了一套完整的表达克隆。经过多轮优化,到目前为止已成功表达纯化了其中的17个蛋白质,同时整合其他来源,该团队最终获得了20个新型冠状病毒的蛋白质。在此基础上于3月2日14时14分完成了首款新型冠状病毒蛋白质组芯片的构建(图1)。图1. 新型冠状病毒蛋白质组芯片。A. 芯片整体质控。一张芯片上有14个相同的点阵,可最多用于14个样本的同步分析;B. 点阵中蛋白质的排布;C. 实际样本的初步测试结果。新型冠状病毒蛋白质组芯片对于深入研究病毒-宿主相互作用、病人的病毒特异性血清反应、疫苗效果等具有重要价值。该团队将秉持开放的心态,积极地与相关科研团队和科技企业合作,争取在最短的时间内最大程度地发挥蛋白质组芯片的高通量全局性分析优势,以期对疫情防控有所帮助。该芯片的主要应用点包括但不限于:1. 血清学分析。采用该芯片分析病人和康复人员血清或血浆,可全面地研究新型冠状病毒引发的病毒特异性抗体响应及其动态变化,将帮助我们理解机体的免疫响应过程,发现病毒的优势蛋白抗原,对确定哪些康复人员的血浆有更好的保护效果可能也会有帮助。2. 疫苗评估。疫苗的作用是预先建立免疫防御能力。无论是动物实验或是临床试验,动态监控疫苗注射后血清中针对各种蛋白组分的抗体水平,并将其与防御能力进行关联分析,将助力疫苗的筛选和前期评估,加速疫苗的开发进程。3. 病毒-宿主相互作用研究。利用该芯片可在全局水平上进行宿主关键蛋白与病毒蛋白质相互作用研究、翻译后修饰调控研究,以助力对病毒侵染、复制合成等关键机制的揭示,并给出有潜力的靶蛋白用于药物开发研究。该团队积极响应国家号召,把研究成果第一时间公开,希望能有助于疫情防控,详细数据和进一步结果将会在近期发布。
上海交通大学 2021-04-10
蛋白非经典分泌过程关键步骤成果
日前,清华大学生命学院葛亮课题组在《细胞》(Cell)期刊上在线发表题为“蛋白跨膜转运调节非经典蛋白分泌”(A translocation pathway for vesicle-mediated unconventional protein secretion)的研究论文,首次报道了非经典分泌过程中的蛋白跨膜转位机制。蛋白质的分泌是细胞间信息传递的重要方式。分泌蛋白通常具有N端信号肽序列以指导新生多肽链进入内质网(endoplasmic reticulum,ER)被加工、修饰,之后被运输到高尔基体(Golgi apparatus)经过进一步的加工,最终抵达细胞质膜并被释放到细胞外,这一过程被称为经典分泌途径。近年来的研究发现,许多分泌蛋白不具有典型的信号肽序列,其分泌不依赖于ER-Golgi途径,这类分泌途径被称为非经典分泌(unconventional protein secretion, UPS)途径。直接跨质膜转位(I型)与细胞内囊泡结构介导的分泌(III型)是最主要的两种UPS途径。III型UPS中,蛋白首先进入一个囊泡载体(例如autophagosome, endosome等),然后通过膜泡运输系统被运送到细胞外。由于这类蛋白缺少信号肽,一个需要解决的关键问题就是这类UPS蛋白是如何进入囊泡载体中的。 图1. TMED10介导的蛋白质非经典分泌途径工作模型在这项研究中,研究人员鉴定出一个膜蛋白TMED10可能形成一个蛋白通道介导UPS蛋白进入囊泡结构。细胞实验发现,TMED10能够调控大量非经典分泌蛋白的分泌,包括炎症因子IL-1家族成员,galectin1和galectin3,以及小分子伴侣蛋白HSP5B。CLP诱导的败血性休克(Cecal Ligation and Puncture (CLP)-induced septic shock)小鼠模型中,TMED10髓系敲除的小鼠分泌更少的IL-1β, 进而导致更低的炎症反应与更高的存活率。进一步的研究发现,TMED10的C末端区域与分泌蛋白的一个motif的相互作用对蛋白的选择性转运与分泌非常重要。体外脂质体实验证明,TMED10直接介导UPS蛋白进入脂质体,并且这一过程依赖于蛋白质的去折叠。在细胞中,TMED10定位于ERGIC(ER-Golgi intermediate compartment)并且能够指导分泌蛋白进入这一膜性细胞器中。此外,研究还发现货物蛋白与TMED10的结合会诱导TMED10寡聚化形成蛋白通道从而介导蛋白的转位。基于这些实验数据与之前的研究成果(Zhang et al., 2015),作者提出如图所示的TMED10介导的蛋白质非经典分泌途径(TMED10-channeled UPS , THU)工作模型(图1)。UPS蛋白在胞质分子伴侣HSP90A的帮助下去折叠并被运送到ERGIC,结合TMED10诱导其发生寡聚化形成蛋白通道,在腔内分子伴侣HSP90B1的帮助下转位进入ERGIC,之后可能通过ERGIC形成运输小泡,直接运送到细胞质膜,或进入分泌型自噬体或分泌型自噬溶酶体/MVB,分泌型自噬体又可以直接和质膜融合或首先与溶酶体融合,最终将蛋白释放到细胞外。生命学院研究员葛亮为本文的通讯作者,实验室张敏老师与生命学院博士生刘磊为本文共同第一作者。本研究受到基金委和科技部的经费资助。文章链接:https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.03.031
清华大学 2021-04-11
新型蛋白酶酶法制备明胶技术
已有样品/n本项目筛选获得了一个蛋白酶,并利用该酶建立了制备明胶的新工艺。与传统酸碱法相比,该工艺能够节约淡水50%以上,生产周期从60-100天缩短为5-10天,同时大幅降低酸碱试剂的消耗量,与普通酶法相比,成本降低,产品质量和得率将大幅提高。本技术适用于现有明胶厂的工艺升级替代。总投资额600-1000万元,综合成本降低20%,三废排放降低30%。
中国科学院大学 2021-01-12
蛋白、多肽类药物有关产品定制合成技术
传统的蛋白质获取方式依赖于生物系统,其构成通常局限于自然界常见的 20 种天然氨基酸,并不能满足相关的需求。化学合成蛋白从原理上可以合成任何物理规律所允许的蛋白质分子,极大丰富蛋白质的种类和功能。 本团队针对多肽和蛋白质化学合成所开发的一系列具有自主知识产权和独特优势的技术方法(如能合成>400AA 的蛋白合成;利用化学全合成方法合成最大膜蛋白;合成富含 4 对二硫键的具有生理功能的多肽,甚至已实现 7 对二硫键多肽的合成;开发出一系列方法实现 2 环肽的合成,并正在发展多环肽的合成技术;各种修饰多肽的成熟合成技术), 针对科研院所和药企提供基于多肽与蛋白质化学合成技术的客户肽产品定制和药物筛选合成服务。 
中国科学技术大学 2021-04-14
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